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第一部分:粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子作用于白血病深Ⅱ度烧伤创面愈合影响机制体外研究目的:在体外分析研究的基础上,确定GM-CSF作用于表皮成纤维细胞增殖等相关生物学信息分析,为下文研究提供基础。材料与方法:选取人体表皮成纤维细胞作为研究对象,采用原代细胞培养模式进行培养,选取第三代单层细胞作为研究对象,在GM-CSF浓度（0、10、50、100、200ng/ml）刺激下继续培养48小时,进行相关指标分析;HE染色分析;免疫组织化学染色分析Survivin、Bax、Bcl-2;CCK-8检测细胞增殖、Annexin-V/PI检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移;双荧光素酶检测JNK/c-Jun信号通路关键蛋白活性;WB检测各组细胞Survivin、JNK/c-Jun信号通路关键蛋白浓度表达,分析数据,给出结论。结果:HE染色:随着GM-CSF干预成纤维细胞浓度增加,细胞的密度及连接性明显增加,在100ng/ml到200ng/ml时细胞密度增加减缓;免疫组织化学染色:当GM-CSF表达浓度处于0～100ng/ml范围内,随着GM-CSF浓度的增加,Survivin及Bcl-2表达浓度增加,当GM-CSF表达浓度为200ng/ml时,Survivin及Bcl-2表达趋势减缓,数据差异具有统计学意义（P＜0.05）;促细胞凋亡蛋白Bax mRNA表达体现出相反的趋势;CCK-8检测细胞增殖:GM-CSF干预初始,各组成纤维细胞的增殖趋势相同;随着干预时间的增加,各组细胞在12小时、24小时及48小时的增殖趋势体现出相同的变化规律,各组成纤维细胞的增殖趋势比较为0ng/ml＜10ng/ml＜50ng/ml＜100ng/ml,当 GM-CSF 浓度为 200ng/ml 时,成纤维细胞的增殖趋势出现降低,数据差异具有统计学意义（P＜0.05）;细胞凋亡率:在0～100ng/ml浓度区间内,随着GM-CSF表达浓度的增加,成纤维细胞的凋亡趋势逐渐降低,而当GM-CSF表达浓度为200ng/ml时,成纤维细胞的凋亡趋势再次呈现出增加趋势,数据差异具有统计学意义（P＜0.05）;划痕实验:在0～100ng/ml浓度区间范围内,随着GM-CSF在成纤维细胞内干预浓度的增加,成纤维细胞的迁移速率逐渐增加,细胞的活性逐渐增加,当GM-CSF表达浓度为200ng/ml后,细胞的迁移速率趋势减缓,数据差异具有统计学意义（P＜0.05）;RT-PCR及Western-blot检测:Survivin、Bax、Bcl-2蛋白表达:当GM-CSF表达浓度处于0～100ng/ml范围内,随着GM-CSF浓度增加,成纤维细胞Survivin及Bcl-2表达浓度增加,当GM-CSF表达浓度为200ng/ml时,细胞内Survivin及Bcl-2表达趋势减缓,数据差异具有统计学意义（P＜0.05）;促细胞凋亡蛋白Bax mRNA表达体现出相反的趋势;c-Jun信号通路:在0～100ng/ml内,随着GM-CSF在细胞内干预浓度的增加,JNK/c-Jun信号通路被有效激活,JNK及其磷酸化表达浓度增加,当GM-CSF表达浓度为200ng/ml时,JNK及其磷酸化表达浓度减缓,数据差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:GM-CSF靶向JNK/c-Jun信号通路蛋白浓度变化调控人体表皮纤维细胞的增殖及凋亡趋势;随着GM-CSF干预成纤维细胞表达浓度的增加,JNK/c-Jun信号通路被有效的激活,成纤维细胞的增殖趋势逐渐增强,凋亡趋势逐渐降低,抗凋亡性增加,呈现出剂量依赖性特点;当其表达浓度为100ng/ml时,细胞体现出最佳的增殖趋势,可以较好的运用与表面皮肤再生的过程中给予下文研究鉴定基础。第二部分:粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子作用于白血病深Ⅱ度烧伤创面愈合影响机制体内研究目的:确定GM-CSF作用于慢性粒细胞白血病深Ⅱ度烧伤创面愈合机制相关生物学信息分析,给予临床一定的研究启发。材料与方法:选取Wistar大鼠26只,雄性2只、雌性24,2只雄性大鼠尾静脉注射剂量为200 mg/kg的5-Fu,4天后安乐死,选取后股骨骨髓,采集骨髓细胞,制作骨髓细胞悬液,逆转录病毒感染二次感染后,离心重悬后计数,细胞计数为2x106个/mL,剩余24只雌性大鼠每只腹腔注射细胞悬液8ml,同时采用500 cGy辐照,饲养2周后雌性大鼠出现慢性粒细胞白血病（CML）。24只分成两组:对照组（大鼠做深Ⅱ度烧伤创面模型+常规空白凝胶）、实验组（大鼠做深Ⅱ度烧伤创面模型+GM-CSF凝胶）;并且在创口区进行取材,进行相关项目分析:大鼠模型成功率验证:大鼠体重、创面愈合率、创面溶痂率分析;GM-CSF促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合细胞增殖、炎症反应机制分析分析:HE染色、免疫组织化学染色分析各组组织不同时间段内炎症因子以及中性粒细胞比例分析;ELISA检测大鼠创面组织炎症因子IL-6、NE、MMP-1、MMP-9 浓度表达;Western-blot 检测各组组织 Survivin、Bax 及Bcl-2浓度表达;GM-CSF促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合微血管屏障机理分析:免疫荧光化学染色分析Ang-1、PECAM-1、VEGF在各组细胞内荧光表达浓度;Western-blot检测各组大鼠烧伤组织中Ang-1、PECAM-1、VEGF蛋白浓度表达;双荧光素酶检测JNK/c-Jun信号通路关键蛋白活性。结果:烧伤创面观察:随着时间的延长,两组大鼠的创口愈合程度均有一定程度的修复,GM-CSF凝胶组大鼠的修复程度明显的好于对照组常规凝胶组大鼠;大鼠体重变化:随着时间的延长,两组大鼠的体重出现先降低后增加的趋势,对照组体重小于实验组,两组数据之间比较,P＞0.05,数据差异不具有统计学意义。创面溶痂率分析:随着时间的延长,两组大鼠的创面溶痂率均有较大程度提高,整体上创面溶痂率,对照组＜实验组,两组数据之间比较,P＜0.05,数据差异具有统计学意义;GM-CSF促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合细胞增殖、炎症反应机制分析分析:HE染色:随着时间的延长,两组大鼠炎症细胞的浸润度明显的提升,实验组更为明显;在第5天时两组大鼠的炎症细胞反应强烈,后期创面被肉芽组织等充分填充;两周后,实验组大鼠的创面已经部分出现上皮化;免疫组织化学染色:随着烧伤时间的延长,两组大鼠创伤组织的中性粒细胞以及巨噬细胞的数量及密度等均有一定程度增加,实验组较对照组要明显增加;ELISA检测:随着时间的延长,两组大鼠的IL-6、NE、MMP-1、MMP-9浓度表达均有一定程度提升,实验组较为明显,两组数据在各个时间段比较,P＜0.05,数据差异具有统计学意义;Western-blot检测:Survivin及Bcl-2蛋白浓度表达出相同趋势,实验组高于对照组,两组数据相比,P＜0.05,差异具有统计学意义;促细胞凋亡蛋白Bax体现出相反的趋势,对照组高于实验组,两组数据相比,P＜0.05,差异具有统计学意义;GM-CSF促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合微血管屏障机理分析:免疫荧光化学染色分析:Ang-1、PECAM-1及VEGF等因子浓度表达体现出相同的趋势,GM-CSF组大鼠组织表达高于对照组;Western-blot检测:GM-CSF组大鼠表达高于对照组,P＜0.05,有统计学意义;应用双荧光素酶基因系统检测JNK/c-Jun信号通路关键蛋白活性:两组JNK及p-JNK表达趋势体现出相同的规律性,对照组＜实验组,两组数据之间比较,P＜0.05,数据差异具有统计学意义。结论:在CML大鼠烧伤愈合的促进过程中,GM-CSF凝胶较常规凝集体现出更好的愈合效果;GM-CSF可以有效激活烧伤组织周围细胞的JNK/c-Jun信号通路,使得周围细胞的增殖趋势等明显加强,加速周围炎症细胞诸如中性粒细胞、巨噬细胞的数量及密度等,有效地促进机体炎症因子及诸多金属基质蛋白酶的释放过程;降低组织血管的通透性以及减少创面微血管渗漏来有效促进烧伤创面的愈合过程;但是关于JNK/c-Jun信号通路参与到大鼠表面创伤的炎症反应、血管屏障等过程的机制尚需要进一步证实。