弓形虫作为一种胞内寄生虫可以感染几乎所有温血动物的有核细胞,建立起慢性感染并随着宿主免疫力的下降而繁殖。巨噬细胞作为体内优先被弓形虫感染的细胞,在控制弓形虫的繁殖和寄生方面发挥重要的作用,其引起的免疫反应是对抗弓形虫早期感染的关键。之前的研究表明,弓形虫在早期入侵和感染时会抑制宿主免疫细胞的免疫反应,从而确保其顺利寄生。RNA修饰作为近年来的研究热点,被发现在机体生长发育、疾病的发生发展以及宿主免疫等方面都发挥着重要作用。其中m~6A是生物体RNA最丰富的修饰之一,被证明参与了许多细胞中的免疫调节。最近的研究表明,m~6A甲基转移酶METTL14在巨噬细胞活化的负反馈控制和巨噬细胞的极化中发挥着重要作用。也有结果显示METTL14参与了细胞中M1型分化因子IL-12和TNF-α等的产生。因此我们认为,METTL14可能也参与了弓形虫感染宿主细胞早期的免疫过程。为了探索宿主m~6A在弓形虫的寄生过程中发生了什么改变,我们检测了弓形虫感染后RAW264.7细胞中METTL14的表达,发现无论是在12h还是24h的感染时间,METTL14均呈降低趋势。在此基础上,我们构建了带有GFP标签的METTL14过表达的转染质粒—pc DNA3.1-METTL14-GFP—转染进RAW264.7细胞,观察METTL14的表达是否会挽救弓形虫对巨噬细胞免疫激活的抑制。我们通过检测了NF-κB通路相关蛋白及下游细胞因子的表达,确定了METTL14的高表达能够上调弓形虫感染的巨噬细胞中NF-κB信号通路关键蛋白p65的磷酸化激活,并调控IL-12、TNF-α的分泌。同时对于M1型标志物i NOS表达的检测结果显示,METTL14高表达也可以很好的上调由I型弓形虫引起的i NOS表达抑制。这表明METTL14可以挽救I型弓形虫对M1型巨噬细胞的免疫抑制。随后,我们在METTL14高表达的RAW264.7中以低MOI感染弓形虫,并通过绝对荧光定量q PCR的方法,检测了METTL14对巨噬细胞控制弓形虫生长的作用。结果显示,METTL14高表达组的弓形虫数量少于对照组。综上所述,本研究通过在RAW264.7中过表达METTL14,确定了METTL14能够上调NF-κB信号通路关键蛋白及下游炎性因子IL-12、TNF-α和i NOS的分泌表达,从而促进巨噬细胞M1型分化,挽救了由I型弓形虫引起的巨噬细胞的促炎免疫抑制,进而抵抗弓形虫的早期感染。在本研究中,以RNA m~6A修饰的调控蛋白METTL14为切入点,我们证明了METTL14对宿主免疫通路的调控作用,并初步阐明了其在控制早期弓形虫感染中发挥的作用,为之后研究弓形虫引起的宿主免疫与m~6A之间的关系和抗弓形虫药物的开发研究提供了理论基础。