论文部分内容阅读
艾叶为菊科植物艾（Artemisia argyi Lévl.et Vant.）的干燥叶,是一种常用中药材,外用散寒止痛,内用温经止血。研究表明其主要有效成分为挥发油、黄酮、鞣酸、多糖等,但前人的研究大部分集中于艾叶挥发油部分,对黄酮部分研究较少。近年发现艾叶中含有丰富的多酚类成分,尤其是黄酮类,表现出广泛的生物活性,在药用和保健品领域具有较大的应用前景。本论文旨在从化学成分、质量控制、纯化工艺和药理活性四个方面对艾叶黄酮进行系统性研究,为后续艾叶黄酮的产品开发提供参考。具体研究分为四个部分:（1）为了阐明艾叶的药效物质基础,对艾叶黄酮部位的化学成分进行了研究。采用硅胶柱层析、凝胶层析和制备液相色谱等手段,对艾叶乙酸乙酯部位进行分离纯化,根据理化性质、光谱数据鉴定化合物结构。经分离鉴定得到14个化合物,分别是（1）artemisolide、（2）蔓荆子黄素、（3）矢车菊黄素、（4）异泽兰黄素、（5）棕矢车菊素、（6）高车前素、（7）5,7,3′-三羟基-6,4′,5′-三甲氧基黄酮、（8）6-甲氧基苜蓿素、（9）茵陈色原酮、（10）芹菜素、（11）5,7,3′-4′-四羟基-6,5′-二甲氧基黄酮、（12）圣草酚、（13）木犀草素-7-O-芸香糖苷、（14）芹菜素-7-O-芸香糖苷,其中化合物13、14为首次从艾叶中分离得到。（2）为比较道地药材蕲艾与其他产地艾叶的区别,需要更系统、全面地质量评价方法,本文首先利用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS对艾叶的化学成分进行了定性分析,鉴定了黄酮和酚酸类成分各6种,在此基础上建立艾叶主要成分的UPLC-DAD含量测定方法。采用Xtimate UHPLC C18色谱柱（2.1×100 mm,1.8μm）,以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1,检测波长330 nm,建立12种成分的测定方法,各成分质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度、重复性和稳定性良好（RSD<3.0%）;加样回收率为103.21109.11%。该方法应用于不同产地艾叶中相关成分的测定,发现蕲艾中有7种成分的含量显著高于其他产地药材。（3）优选大孔树脂分离纯化艾叶醇提物中总黄酮的工艺,通过静态和动态吸附-洗脱试验比较21种不同型号大孔树脂对艾叶总黄酮的吸附和解吸性能,筛选出最佳树脂型号;以总黄酮质量浓度为指标,采用单因素试验考察纯化工艺条件。实验表明AB-8大孔树脂对艾叶总黄酮具有较好的吸附解吸能力。AB-8大孔树脂富集纯化艾叶总黄酮最佳工艺为:吸附液质量浓度为0.74mg/mL,上样流速为2 BV/h,上样量为6 BV,洗脱剂为55%乙醇,洗脱剂用量为6 BV,洗脱流速为2 BV/h。该优选工艺稳定可行,适用于艾叶总黄酮的分离纯化及标准提取物的制备。（4）为评价大孔吸附树脂纯化艾叶总黄酮的药用价值,深入研究了艾叶总黄酮（AATF）的抗炎和抗氧化活性。以LPS刺激RAW264.7细胞构建体外炎症模型,采用Griess法和ELISA法分别检测AATF干预下,RAW264.7炎症细胞中的炎性介质、炎性细胞因子的水平。结果发现AATF可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中NO、ROS、PGE2、IL-6、IL-10和MCP-1的含量,且对COX-2酶的活性有一定抑制作用。表明AATF能通过抑制细胞炎性介质、细胞因子的分泌以及COX-2的活性的来改善炎症反应。为对AATF抗氧化活性进行评价,同时进行了DPPH、ABTS、FRAP、羟自由基和超氧阴离子清除活性试验,结果显示AATF的EC50分别为34.0、98.6、59.2、246.2、15.5μg/mL,表明艾叶黄酮亦具有良好的抗氧化活性,该结果为艾叶黄酮的开发利用提供实验数据和理论依据。