[目的]三阴性乳腺癌作为恶性程度高、异质性强和预后较差的一类乳腺癌亚型。目前化疗仍是TNBC的主要药物治疗措施,化疗药物可以促进BCSC的富集从而导致化疗耐药和疾病复发,BCSC的存在对TNBC的治疗来说是重大挑战。所以,靶向调控BCSC的分子或信号通路分子来消除BCSC将为TNBC提供新的治疗策略。我们前期发现GABRP在TNBC中特异性高表达,同时GABRP高表达的TNBC患者总体生存期差,另外富集分析结果显示GABRP高表达与干细胞分化过程相关,说明GABRP可能通过影响肿瘤干性在TNBC恶性进程中发挥重要作用。此研究揭示了靶向GABRP有望成为TNBC治疗靶点并促进TNBC的化疗敏感性。[方法]1.通过qRT-PCR检测GABRP在人乳腺癌细胞系和BCSC中的mRNA表达水平;2.选择GABRP低表达的MDA-MB-231细胞株,高表达GABRP的HCC1806、HCC1937的细胞株,通过构建过表达和敲降载体,利用慢病毒转染细胞,得到稳定过表达和敲降GABRP的TNBC细胞株,通过qRT-PCR和Western blot检测过表达和敲降效率;3.过表达GABRP后,通过MTS实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,通过ALDH实验检测ALDH+细胞群比例变化;4.过表达GABRP后,用不同浓度的化疗药物紫杉醇和阿霉素处理细胞后,通过MTS增殖实验检测TNBC细胞株对化疗药物的敏感性;5.敲降GABRP后,用化疗药物紫杉醇和阿霉素不同浓度处理细胞后,通过MTS增殖实验检测TNBC细胞株对化疗药物的敏感性;6.HCC1806敲降GABRP后,通过紫杉醇、阿霉素和顺铂可以富集BCSC的药物浓度处理细胞后,通过克隆形成实验检测克隆形成数量。紫杉醇处理细胞后,通过CD24lowCD44high流式实验检测BCSC比例变化;7.过表达GABRP后,通过qRT-PCR检测CSC相关转录因子的mRNA水平;8.HCC1806 敲降 GABRP 后,通过 qRT-PCR 检测 Hh、Wnt 和 Notch 信号通路相关分子的mRNA水平;9.经化疗药物处理HCC1806和HCC1937后,通过Western blot检测GABRP、EGFR、p-ERK 和 ERK 的表达水平。[结果]1.GABRP在TNBC细胞中高表达;2.GABRP在BCSC中高表达;3.高表达GABRP通过促进BCSC自我更新来抑制TNBC对化疗药物的敏感性,同时低表达GABRP使TNBC对化疗药物更加敏感,并逆转由化疗引起的BCSC富集;4.GABRP高表达促进CSC相关的转录因子的表达;5.低表达GABRP后,Hh信号通路下游分子HH4P、SHH、IHH的mRNA水平降低;6.化疗药物处理TNBC细胞后,可增加GABRP、EGFR、p-ERK的蛋白表达水平。[结论]我们发现GABRP在BCSC中高表达,GABRP高表达不影响TNBC增殖能力,而促进BCSC的自我更新,GABRP低表达可以减少由化疗药物引起的BCSC富集,从而重新恢复TNBC对化疗药物的敏感性。从机制上来说,高表达GABRP可以促进CSC相关的转录因子表达。参与CSC调控的关键信号通路中,GABRP主要影响Hh信号通路相关分子的表达。