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目的本实验主要研究GSK3β及STAT3在食管鳞癌中的表达情况,探讨其与食管鳞癌临床病理特征和预后的关系;检测GSK3β及STAT3抑制剂对食管鳞癌细胞系生长增殖、迁移能力及裸鼠成瘤能力的影响,分析GSK-3β与STAT3两者之间的潜在调控关系,探讨其对食管癌发生发展的作用机制。方法采用RT-PCR和Western blotting的方法检测GSK3β在食管癌及癌旁组织中m RNA和蛋白水平的表达。采用免疫组织化学法检测GSK3β及STAT3在食管癌及癌旁组织中的表达情况。分析GSK3β及STAT3的表达与食管癌患者临床病理特征及预后之间的关系。同时采用RT-PCR检测GSK3β在不同分化食管癌细胞系中的表达情况。应用MTT试验、Wound Healing试验检测GSK3β及STAT3抑制剂对食管癌细胞系生长增殖、迁移能力的影响。将食管癌细胞株KYSE70细胞注射至裸鼠皮下,通过裸鼠成瘤实验,将GSK3β和STAT3抑制剂注射至裸鼠体内,观察其对裸鼠成瘤时间、瘤体大小的影响。应用免疫组化检测不同药物处理组裸鼠肿瘤组织中GSK3β、STAT3、P-STAT3的表达变化。所有统计数据分析应用SPSS17.0软件进行统计,统计结果以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.RT-PCR结果显示,与相应癌旁组织相比,GSK3βm RNA在食管癌组织中表达明显升高(P<0.05),同时,在不同分化程度的食管癌细胞系(ESC)中检测其m RNA水平,结果显示GSK3βm RNA在低分化ESC中(KYSE70)的表达显著高于高、中分化的ESC(KYSE30,EC9706,KYSE140)。Western blotting结果显示,与相应癌旁组织相比,GSK3β蛋白在食管癌组织中表达明显升高,然而磷酸化后的GSK3β(P-GSK3βSer9)在癌旁组织中却明显升高,差异均具有统计学意义。免疫组化结果显示GSK3β及STAT3的阳性表达均呈棕黄色颗粒,主要定位于胞质,部分胞核亦可见着色。在50例食管癌组织、相应癌旁组织中GSK3β的表达阳性率分别为64%、18%,差异有统计学意义(P<0.01),GSK3β的阳性表达与性别、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关,具有显著的统计学差异(P<0.05);STAT3的阳性表达率分别为66%、42%,差异亦有统计学意义(P<0.05),STAT3的阳性表达与淋巴结转移、浸润深度、TNM分期相关(P<0.05)。且GSK3β及STAT3表达呈正相关。随后我们将RT-PCR、Western blotting、免疫组化结果进行相关性分析,结果表明GSK3β在m RNA及蛋白水平表达具有一致性。2.对50例食管癌病人进行随访,结果显示GSK3β阳性组和阴性组30个月生存率分别为56.3%和83.3%;STAT3阳性组和阴性组生存率分别为51.4%和86.6%,Kaplan-Meier生存分析表明,与阴性组相比,GSK3β和STAT3阳性表达组均预后较差(P<0.05)。3.体内外实验表明,应用GSK3β及STAT3抑制剂后,均可以抑制食管癌细胞系KYSE30及KYSE70细胞及裸鼠移植瘤的生长,且两种抑制剂合用后其抑制效果更加明显。免疫组化结果表明,应用GSK3β及STAT3抑制剂后,与对照组相比,GSK3β、STAT3、P-STAT3的表达均发生变化。其结果提示GSK3β可能潜在调控STAT3进而影响食管癌的发生、发展。结论1.GSK-3β及STAT3在食管癌组织中的表达明显高于食管癌旁组织,提示其可能参与食管癌的发生、发展。且两者在食管癌的发展中可能具有协同作用;GSK3β及STAT3可能成为食管癌患者预后的指标。2.GSK3β及STAT3抑制剂抑制了食管鳞癌细胞的增殖、迁移能力及裸鼠移植瘤的生长;GSK3β可能潜在调控STAT3影响食管鳞癌的发生发展,两因子可能成为食管鳞癌治疗的分子靶标。