TNF-α、IL-1β通过PKA/CREB信号通路诱导成纤维样滑膜细胞中力生长因子表达

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力效应细胞是指能对力刺激产生响应的细胞,包括骨骼肌细胞、平滑肌细胞、心肌细胞、成纤维细胞、成骨细胞、内皮细胞等。力效应细胞在受到力刺激时表达IGF-1基因的剪接变异体IGF-1Ec,在人体中称为力生长因子(Mechano growth factor,MGF)。该因子具有多种生物学功能。它能激活肌肉卫星细胞,抑制其分化,促进肌肉肥大,修复肌损伤;也能保持心肌梗塞后心肌的收缩功能,起到心脏保护作用,同时还能有效促进运动神经元撕裂和挤压损伤的恢复。MGF的这些生物学功能在组织修复领域具有广阔的应用前景。组织、器官损伤后,通常伴随着炎症响应。炎性因子TNF-α、IL-1β提高成纤维样细胞中第二信使cAMP的表达水平,而第二信使对MGF的表达有促进作用。因而,炎症响应与MGF的表达调控是否存在联系是值得我们探讨的问题。本课题主要研究工作和结果如下:  ①使用组织块培养法提取人成纤维样滑膜细胞,并对原代提取的细胞进行H&E染色和成纤维样细胞标记Vimentin的免疫组化鉴定。建立后续实验所需的细胞库。  ②运用定量PCR方法检测正常成纤维样滑膜细胞(FLSs)和类风湿性关节炎滑膜细胞(RA-FLSs)中MGF的表达水平,结果发现RA-FLSs细胞中MGF的平均水平较FLSs中高,但两组表达量没有统计差异。  ③分别用炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6刺激FLSs,检测MGF mRNA的表达量。实验发现TNF-α、IL-1β能显著诱导MGF表达的提高。IL-6对MGF表达无影响。  ④以PKA信号通路特异性抑制剂KT5720预处理FLSs,随后用TNF-α、IL-1β刺激细胞,收集细胞总RAN和总蛋白,检测MGF mRNA表达量,以及PKA信号通路下游转录因子CREB及其Ser133位磷酸化p-CREB蛋白的表达差异。研究发现,TNF-α、IL-1β诱导的MGF表达是通过PKA/CREB信号通路实现的。  综上所述,我们认为TNF-α、IL-1β通过PKA/CREB信号通路诱导人FLSs细胞中MGF的表达。
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