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目的本文旨在关注中药——人参对脑缺血再灌注损伤时细胞炎症反应的改善。采用多种提取方法进行比较，通过条件优化选出简单，快速，准确，成本较低的方法，从人参中提取出人参皂苷Rg1。然后进一步研究提取后的人参皂苷Rg1对脑缺血再灌注时，小胶质细胞相关的因子的调节，以证实人参对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法1首先从重庆中药材市场上购买的中药人参，通过回流法和超声法提取人参总皂苷；然后使用硅胶柱层析法从人参总皂苷中进一步分离人参皂苷Rg1；最后利用购买的人参皂苷Rg1标准品，用高效液相法制作人参皂苷Rg1标准曲线，对提取出的人参皂苷Rg1进行含量测定。通过不同提取方法的比较以及对硅胶柱层析法的条件优化，选择出最优提取分离方案：超声法提取人参总皂苷，硅胶柱层析进一步分离人参皂苷Rg1，高效液相法进行含量测定。2将购买的小胶质细胞，通过传代培养，采用MTT法检测LPS和药物对BV2小胶质细胞生长活力的影响，最终确定最适宜的脂多糖和人参皂苷Rg1的浓度。本实验共分为5组：①对照组，②脂多糖组，③药物组（a.人参皂苷Rg1终浓度为2.5μ mol/L，b.人参皂苷Rg1终浓度为5μ mol/L，c.人参皂苷Rg1终浓度为10μ mol/L）。对照组为BV-2细胞常规培养；脂多糖组为BV-2细胞常规培养加脂多糖培养（脂多糖终浓度为0.1μ g/mL）；药物组又分为BV-2细胞常规加a.人参皂苷Rg1终浓度为2.5μ mol/L；b.人参皂苷Rg1终浓度为5μ mol/L; c.人参皂苷Rg1终浓度为10μ mol/L,1h后，再加LPS培养（LPS终浓度为0.1μ g/mL）。处理12个小时之后使用ELSA试剂盒，检测脂多糖诱导小胶质细胞后，细胞上清液中IL-1，NF-kB以及iNOS的表达量的变化。结果1本研究通过高效液相法制作人参皂苷标准曲线标准曲线的定量范围为3.5——17.5μ g，相关系数R2为0.9994。采用硅胶柱层析分离合并的35g人参总皂苷，得到人参皂苷Rg19.91g，纯度为89.63%。2第二部分采用MTT法检测LPS和人参皂苷Rg1对细胞活力的影响，最后选定诱导小胶质细胞的LPS浓度为0.1g/mL，加入的人参皂苷Rg1浓度选择2.5μmol/L，5μmol/L和10μmol/L。然后利用IL-1，NF-kB和一氧化氮合酶试剂盒检测LPS诱导小胶质细胞活化后产生和表达的IL-1，NF-kB和iNOS。结果显示，（1）IL-1：与对照组比较，LPS组的IL-1含量显著升高(P＜0.05)。与LPS组相比，不同浓度的人参皂苷Rg1作用BV-2细胞后，IL-1的表达量逐渐降低，与LPS组差距显著，其中人参皂苷Rg1浓度为2.5μ mol/L时，无统计学差异，而与LPS相比人参皂苷Rg15μ mol/L组，P＜0.05,人参皂苷Rg110μ mol/L组，P＜0.01。说明人参皂苷Rg1预先处理细胞以后，能减少小胶质细胞的炎症因子IL-1的表达。（2）iNOS：与对照组比较，LPS组的iNOS含量显著升高(P＜0.01)。与LPS组比较，不同浓度的人参皂苷Rg1作用BV-2细胞后，iNOS的表达量逐渐降低，与LPS组差距显著。人参皂苷Rg12.5μ mol/L组和人参皂苷Rg15μ mol/L组，P＜0.05,人参皂苷Rg110μ mol/L组，P＜0.01。说明人参皂苷Rg1预先处理细胞以后，能减少小胶质细胞iNOS的表达。（3）NF-kB：与对照组相比，LPS组的NF-kB表达量明显升高(P＜0.01)。与LPS组比较，不同浓度的人参皂苷Rg1作用BV-2细胞后，NF-kB的表达量逐渐降低，与LPS组差距显著。人参皂苷Rg12.5μ mol/L组，人参皂苷Rg15μ mol/L组以及人参皂苷Rg110μ mol/L组与LPS组比较NF-kB表达量明显降低(P＜0.01)，具有统计学意义。结论1本研究通过方法比较和条件优化最后确定使用超声法提取人参总皂苷；硅胶柱层析法分离人参皂苷Rg1，优化的分离条件为：m(生药):m(硅胶)＝1:3，V(乙醇) V(乙酸乙酯)=1:3的混合洗脱剂，洗脱剂流速为2.5mL/min；高效液相法制备人参皂苷Rg1标准曲线，并用相同方法进行含量测定。最终提取出人参皂苷Rg19.91g,其纯度达到89.63%，这种方法快速，简便，成本较低，纯度基本符合要求。2采用MTT法检测LPS和人参皂苷Rg1对细胞活力的影响，，最后选定诱导小胶质细胞的LPS浓度为0.1g/mL，加入的人参皂苷Rg1浓度选择2.5μmol/L，5μmol/L和10μmol/L。通过LPS诱导小胶质细胞建立脑缺血再灌注中的炎症模型，利用EILSA试剂盒检测相关因子的表达量，证实人参皂苷Rg1可以抑制炎症反应中相关因子的表达，从而对脑缺血再灌注的细胞有保护作用。