有机分析试剂与蛋白质显色反应及其应用研究

来源 :湖南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:JockWang
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本文在查阅大量关于染料与蛋白质作用的文献基础上,提出了用对-二甲胺基亚苄罗丹宁(p-DBR)、对-氯酚偶氮罗丹宁(CPARH)、4-(2-噻唑偶氮)-1,3-二羟基萘(TADNm)、-2'-苯并噻唑偶氮-1,8-二羟基-3,6-萘二磺酸(BTAC)等测定蛋白质的方法。主要研究内容: 1.研究了蛋白质与p-DBR的结合反应,HSA浓度在3.6×10-8mol·L-1~1.0×10-7mol·L-1范围内,该反应符合Pesavento模式。反应的最佳条件为pH8.0,7.0×10-5mol·L-1p-DBR,1.25×10-4mol·L-1CTMAB,室温显色15min。在该条件下,HSA与p-DBR生成橙黄色复合物,最大吸收波长在480nm,表观摩尔吸光系数为3.4×106L·mol-1·cm-1。该方法可用来测定生物样品中的蛋白质,线性范围为1.2mg·L-1~11.0mg·L-1,最低检测限为0.42mg·L-1,回收率为95%~102%。 2.研究了蛋白质与CPARH的结合反应。反应的最适条件为:pH4.0,2.0×10-4mol·L-1CPARH,5.0×10-5mol·L-1CTMAB,室温显色15min。在此条件下,HSA与CPARH生成橙黄色复合物,最大吸收波长为460nm,表观摩尔吸光系数为4.7×105L·mol-1·cm-1。利用该体系可测定蛋白质,线性范围为12.0mg·L-1~96.0mg·L-1。 3.研究了蛋白质与TADNm的结合反应。该反应在HSA浓度为3·6×10-7mol·L-1~8.1×10-7mol·L-1范围,符合Pesavento模式,最大结合数为212。显色反应的最适条件为pH5.0,1.5×10-4mol·L-1TADNm,0.0050%TritonX-100,室温显色10min。HSA与TADNm生成橙红色复合物,最大吸收波长在500nm,表观摩尔吸光系数为5.1×105L·mol-1·cm-1。用HSA-TADNm复合物测定血清等生物样品中蛋白质时,线性范围为12.0mg·L-1~48.0mg·L-1,最低检测限为2.1mg·L-1。 4.研究了蛋白质与BTAC的结合反应。该反应的最适条件为pH4.0,1.25×10-4mol·L-1BTAC,室温显色15min。HSA-BTAC复合物为紫红色,最大吸收波长为580nm,表观摩尔吸光系数为2.7×105L·mol-1·cm-1。该方法可用来测定生物样品中的蛋白质,线性范围为48.0mg·L-1~120.0mg·L-1,最低检测限为8.0mg·L-1。
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