【摘 要】
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目的:本实验建立ADSC-EV与CD4+T细胞体外共同培养体系,流式细胞术检测两者共培养后调节性T细胞（regular T cells,Tregs）比例的改变,进而探究ADSC-EV的免疫调节功能及其可能发挥的免疫调节机制,为以ADSC-EV为基础非细胞治疗自身免疫性疾病、炎症性疾病奠定实验基础。方法:采用I型胶原酶消化法提取并培养原代小鼠ADSC,检测其表面特异性标记物CD29,Scal-1,C
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目的:本实验建立ADSC-EV与CD4+T细胞体外共同培养体系,流式细胞术检测两者共培养后调节性T细胞（regular T cells,Tregs）比例的改变,进而探究ADSC-EV的免疫调节功能及其可能发挥的免疫调节机制,为以ADSC-EV为基础非细胞治疗自身免疫性疾病、炎症性疾病奠定实验基础。方法:采用I型胶原酶消化法提取并培养原代小鼠ADSC,检测其表面特异性标记物CD29,Scal-1,CD34,CD45的表达,茜素红、油红O、甲苯胺蓝染色检测其向骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化的能力。免疫磁珠阴性分选法提取小鼠脾脏CD4+T细胞。收集P3-P6代细胞上清液,用超速离心的方法分离细胞外囊泡,透射电镜检测细胞外囊泡的形态、用Western Blot方法对细胞外囊泡的标志蛋白CD9、CD63进行鉴定。细胞共培养实验分为4组,（1）空白对照组:单独培养CD4+T细胞;（2）10ul细胞外囊泡干预组:10ul EV+CD4+T细胞;（3）20ul细胞外囊泡干预组:20ul EV+CD4+T细胞;（4）阳性对照组:他克莫司+CD4+T细胞。72h后回收各组CD4+T细胞悬液,通过流式细胞仪检测Treg细胞所占比例。Treg细胞比例以x±s表示,应用SPSS25.0统计软件,将空白对照组、10ul EV干预组、20ul EV干预组、阳性对照组两两对比采用方差分析（LSD-t）检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:从小鼠脂肪提取的ADSC符合国际间充质干细胞鉴定指标的标准。小鼠脂肪间充质干细胞外囊泡透射电镜下呈双层膜包裹的囊泡状形态,并具备典型蛋白标志物。空白组对照组CD4+CD25+Foxp3+T细胞的百分比为8.25±0.16,10ul EV干预组CD4+CD25+Foxp3+T细胞的百分比为10.11±0.44,20ul EV干预组CD4+CD25+Foxp3+T细胞的百分比10.32±0.78,阳性对照组CD4+CD25+Foxp3+T细胞的百分比为12.90±0.77。10ul EV干预组、20ul EV相比于空白对照组,P<0.05,差异符合统计学意义,而10ul EV干预组与20ul EV干预组间差异无统计学意义（P>0.05）。细胞外囊泡通过增加Treg细胞比例,从而发挥免疫调节功能。结论:小鼠脂肪源性间充质干细胞可以分泌细胞外囊泡的能力,并且衍生细胞外囊泡可以刺激CD4+T细胞转化为Treg细胞,从而发挥调节免疫功能,在非细胞免疫调节治疗领域中丰富了研究方法。
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