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第一部分 右美托咪定预处理通过α2-肾上腺素能受体抑制内质网应激减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤目的探讨右美托咪定预处理是否通过α2-肾上腺素能受体(α2-adrenergicreceptor,α2-AR)抑制内质网应激,从而减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤,并初步探讨其机制。方法雄性SD大鼠75只(230-270g),随机数字表法分为5组,每组15只:假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、右美托咪定+缺血/再灌注组(Dex+I/R组)、育亨宾(Yohimbine,Yoh)预处理+缺血/再灌注组(Yoh+I/R组)、育亨宾+右美托咪定预处理组(Yoh+Dex+I/R组)。本实验采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30min后松结再灌注6h的方法构建心肌缺血/再灌注损伤模型。右美托咪定经右侧颈内静脉泵注,先以6μg.kg-1.h-1泵注10min,再以0.7μg.kg-1.h-1泵注15min。育亨宾为α2-肾上腺素受体拮抗剂,经右颈内静脉泵注,先以1mg.kg-1泵注5min,再以0.5mg.kg-1.h-1泵注20min。通过Evans Blue-TTC双染色法检测心肌缺血及心肌梗死面积,实时荧光定量PCR检测心肌组织内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein 78,GRP78)、CCAAT 增强子结合蛋白 同 源蛋白(CCAAT-enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)及炎性因子IL-1β、IL-6 mRN A 的表达水平;Western blotting检测心肌组织p-PERK、GRP78、CHOP、cleaved caspase 3蛋白的相对表达水平;HE染色观察心肌组织病理损伤情况;心肌组织TUNEL(DAB)染色检测心肌组织细胞凋亡率;ELISA法检测血清心肌钙蛋白cTnI的浓度。结果与Sham组相比,I/R组心肌梗死面积明显增加(P<0.05),GRP78、CHOP mRNA水平明显升高(P<0.05),IL-1β、IL-6mRNA水平明显升高(P<0.05),GRP78、p-PERK、CHOP、cleaved caspase 3蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05),病理损伤情况明显加重、心肌细胞凋亡率明显上升、血清cTnI浓度明显升高(P<0.05)。与I/R组相比,Dex+I/R组以上指标均明显降低(P<0.05)。与Dex+I/R组相比,Yoh+Dex+I/R组以上指标均明显上升(P<0.05)。结论右美托咪定预处理可以减轻炎症反应和细胞凋亡,从而减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤,此作用可能与通过α2-AR抑制内质网应激有关。第二部分 右美托咪定预处理通过抑制PERK/CHOP减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤目的探讨右美托咪定预处理是否通过抑制PERK/CHOP通路减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤。方法雄性SD大鼠75只(230-270g),随机数字表法分为5组,每组15只:假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、右美托咪定+缺血/再灌注组(Dex+I/R组)、CCT020312+缺血/再灌注组(CCT+I/R组)、CCT020312+右美托咪定预处理组(CCT+Dex+I/R组)。MI/RI模型和右美托咪定的给药方法与第一部分相同。CCT020312为PERK特异性激动剂,在术前1h以2mg.kg-1的剂量腹腔注射。通过Evans Blue-TTC双染色法检测心肌缺血及心肌梗死面积,实时荧光定量PCR检测心肌组织内质网应激相关分子GRP78、CHOP、及炎性因子IL-1β、IL-6mRNA的表达水平;western blotting检测心肌组织p-PERK、GRP78、CHOP、cleaved caspase 3蛋白的相对表达水平;HE染色观察心肌组织病理损伤情况;心肌组织TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡率;ELISA法检测血清心肌钙蛋白cTnI的浓度。结果与Sham组相比,I/R组心肌梗死面积明显增加(P<0.05),GRP78、CHOP mRNA水平明显升高(P<0.05),IL-1β、IL-6mRNA水平明显升高(P<0.05),GRP78、p-PERK、CHOP、cleaved caspase 3蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05),病理损伤情况明显加重、心肌细胞凋亡率明显上升、血清cTnI浓度明显升高(P<0.05)。与I/R组相比,Dex+I/R组以上指标均明显降低(P<0.05)。与I/R组相比,CCT+I/R组GRP78 mRNA水平及蛋白水平无明显差异(P>0.05),其余指标均明显上升(P<0.05)。与Dex+I/R组相比,CCT+Dex+I/R组GRP78 mRNA水平及蛋白水平无明显差异(P>0.05),其余指标均明显上升(P<0.05)。结论右美托咪定预处理可能通过抑制PERK/CHOP通路减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤。