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焦虑症是一种常见的心理精神疾病,导致了日益增长的全球健康问题。临床上引起焦虑症的原因有很多种,常常伴随有头晕眼花、胸胁憋闷、心悸怔仲、睡眠困难以及呼吸困难等。精神类疾病中,患者终生患病率最高的疾病就是焦虑症,影响到30%的人口寿命。在我国,焦虑症已发展成为现代比较常见且频作的疾病,严重地影响了人们的生活质量。对有效治疗焦虑症药物的开发已成为当今研究的热点问题。合欢皮为豆科植物合欢Albizzia julibrissin Durazz.的干燥树皮,性甘味平,归心、肝、肺经,具有解郁安神、活血消肿的功效,常用于治疗心神不安、忧郁失眠、肺痈,疮肿,跌扑伤痛。合欢皮的药理作用报道较多,但对药典中合欢皮指标性成分丁（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（简称丁香树脂酚糖苷,SAG）的抗焦虑作用研究尚属空白。因此,在课题组前期开展的“复方抗焦虑胶囊研究”基础上,对合欢皮主要成分丁香树脂酚糖苷的抗焦虑作用及机制进行探讨,对拓展合欢皮的临床应用、丰富中医对合欢皮“解郁安神”的认识、制定其质量标准均具有重要的理论及实践意义。本课题采用小鼠高架十字迷宫实验、明暗箱实验和旷场实验,考察合欢皮指标性成分丁香树脂酚糖苷的抗焦虑作用,明确其抗焦虑作用的有效剂量;采用两个经典动物行为学实验初步研究比较丁香树脂酚糖苷及其苷元（-）-丁香树脂酚的抗焦虑作用;采用大鼠急性应激后高架十字迷宫实验和明暗箱实验,对合欢皮指标性成分丁香树脂酚糖苷的抗焦虑作用进行进一步验证,采用高效液相色谱-电化学检测器（HPLC-ECD法）,测定丁香树脂酚糖苷给药对急性应激大鼠脑内单胺及其代谢物含量的影响,并采用酶联免疫法（ELISA法）测定丁香树脂酚糖苷给药对急性应激大鼠HPA轴（下丘脑-垂体-肾上腺轴）的影响。主要研究内容及结果如下:1 药效学部分1.1 丁香树脂酚糖苷对小鼠抗焦虑作用研究及机制初探采用小鼠高架十字迷宫实验（EPM）、明暗箱实验（LDB）、旷场实验评价丁香树脂酚糖苷的抗焦虑作用,并通过注射GABAA系统拮抗剂-氟马西尼和5-羟色胺（5-HT）系统拮抗剂-WAY-100635对丁香树脂酚糖苷的抗焦虑作用机制进行初步探讨。实验结果表明,丁香树脂酚糖苷高剂量组（6mg/kg/d）在三个模型上均表现出稳定的抗焦虑作用,中剂量组（3mg/kg/d）在三个模型上表现出抗焦虑作用,但是不稳定,可以确定丁香树脂酚糖苷抗焦虑作用最佳剂量是6mg/kg/d;加入两种拮抗剂后的实验结果表明,丁香树脂酚糖苷抗焦虑作用机制可能与GABA系统和5-HT系统均有一定关系,与5-HT系统关系更为紧密;自主活动实验结果表明,丁香树脂酚糖苷抗焦虑有效剂量下,不影响小鼠的自主活动能力。1.2 丁香树脂酚糖苷的苷元对小鼠抗焦虑作用初步研究采用小鼠高架十字迷宫实验（EPM）、明暗箱实验（LDB）研究比较丁香树脂酚糖苷及其苷元的抗焦虑作用。实验结果表明,丁香树脂酚糖苷及其苷元在两种模型上具有抗焦虑作用,两者起效剂量分别为3mg/kg,1.8mg/kg,（-）-丁香树脂酚的起效剂量较小。综合两个经典行为学实验结果可以得出,丁香树脂酚糖苷及其苷元均具有一定的抗焦虑作用,且相同条件下,（-）-丁香树脂酚起效剂量相对较小,初步判断同条件下（-）-丁香树脂酚的抗焦虑作用效果优于丁香树脂酚糖苷,而两者之间的抗焦虑作用关系有待深入研究。1.3 丁香树脂酚糖苷对急性应激大鼠模型抗焦虑作用研究采用急性应激大鼠高架十字迷宫实验（EPM）和旷场实验（OFT）进一步评价丁香树脂酚糖苷的抗焦虑作用。EPM实验结果显示:束缚应激造模后,实验动物在高架十字迷宫的开臂探索活动明显受到抑制,闭臂内滞留时间增长;进入旷场中央区次数和活动时间减少,造模成功。在EMP和OFT中束缚应激大鼠均表现出焦虑,而丁香树脂酚糖苷高剂量组（3.6mg/kg/d）可提高大鼠进入开臂的时间和次数,产生抗焦虑作用。2机制探讨2.1 丁香树脂酚糖苷对急性应激大鼠模型脑组织单胺类神经递质及其代谢产物的影响选用高效液相色谱-电化学检测器（HPLC-ECD）法测定丁香树脂酚糖苷给药对急性应激大鼠脑皮层及海马中单胺及其代谢物含量的影响,从神经生物学角度探究丁香树脂酚糖苷抗焦虑作用可能的机制。实验结果显示:丁香树脂酚糖苷高剂量组可以显著降低大鼠脑皮层和海马中去甲肾上腺素（NE）、5羟色胺类（5-HT）递质及其代谢产物的含量,同时也可降低大鼠脑皮层中多巴胺及其代谢产物的含量。提示抑制脑组织中NE、5-HT等神经递质的释放可能是丁香树脂酚糖苷抗焦虑作用的重要机制。2.2 丁香树脂酚糖苷对急性应激大鼠模型下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定应激大鼠血清中下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）各激素水平。实验结果显示,与空白组相比,模型组大鼠血清中HPA轴各激素含量以及糖皮质激素（GC）含量升高,说明模型组大鼠相较空白组处于焦虑状态,应激模型造模成功。与模型组相比,丁香树脂酚糖苷高剂量组（3.6mg/kg）显著降低应激大鼠血清HPA轴各激素以及糖皮质激素含量,调节HPA轴功能是其发挥抗焦虑作用途径之一。3结论本课题分别采用三个经典小鼠行为学实验（EPM、LDB、OFT）探讨丁香树脂酚糖苷的抗焦虑作用,并通过急性应激大鼠EPM、OFT进一步验证了丁香树脂酚糖苷的抗焦虑作用。对丁香树脂酚糖苷抗焦虑作用及机制的研究,明确了其作为合欢皮主要成分,同时也是合欢皮抗焦虑作用有效成分,并推测其抗焦虑作用机制与5-HT能和调控HPA轴功能有关。通过本课题研究,为进一步完善合欢皮质量标准提供理论和实验依据。