目的:探究Hippo-YAP信号通路对Lgr5(Wnt通路靶基因富含亮氨酸重复单位的G蛋白耦联受体5,The Wnt-responsive leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5)阳性内耳干细胞增殖能力的调控作用。方法:通过RT-PCR,Western blot,免疫荧光实验验证Hippo-YAP信号通路在小鼠耳蜗中的表达情况。选取三种小分子药物来调节YAP的表达水平,并利用Western blot,蛋白条带的半定量分析以及q PCR对小分子药物的作用效果进行验证。通过Lgr5阳性内耳干细胞(利用流式细胞仪进行分选)体外成球实验和谱系追踪离体耳蜗组织培养实验,探究Hippo-YAP信号通路对Lgr5阳性内耳干细胞增殖能力的作用。利用q PCR对各实验组YAP下游靶基因、细胞周期相关基因、Wnt信号通路相关基因的m RNA表达水平进行检测,探索可能的机制。结果:1.RT-PCR、Western blot、免疫荧光的结果都表明Hippo-YAP信号通路在小鼠耳蜗中高度表达。2.通过Western blot及其半定量分析、以及q PCR实验证明,三种小分子药物能够调节小鼠耳蜗中YAP的表达水平。3.YAP抑制剂处理3天组Lgr5阳性内耳干细胞体外成球数目比对照组明显减少,球直径也明显小于对照组,且均具有统计学意义。相反地,YAP激动剂XMU-MP-1处理后Lgr5阳性内耳干细胞体外成球数目比对照组明显增多,球直径也比对照组明显增大,两者都具有统计学意义。4.谱系追踪实验结果表明:YAP抑制剂处理组中耳蜗顶中底转Tomato/EDU双阳性细胞数目明显减少,而YAP激动剂XMU-MP-1处理后顶中底转Tomato/EDU双阳性细胞数目明显增加,两者均具有统计学意义。5.YAP抑制剂处理后,耳蜗组织中YAP下游靶基因、ccnd1(细胞周期素D1)基因、Wnt信号通路下游靶基因的表达水平均下降;而YAP激动剂XMU-MP-1处理后,上述基因的表达水平均上升,且均具有统计学意义。结论:Hippo-YAP信号通路在小鼠耳蜗中高度表达。激活YAP不仅可以促进离体培养的流式分选仪筛选出的Lgr5阳性内耳干细胞的增殖,而且还能促进谱系追踪后体外耳蜗组织培养中Lgr5阳性内耳干细胞的增殖。而这可能与YAP激活后促进细胞G1-S期的转换,促进YAP下游增殖相关靶基因(ctgf,cyr61,ankrd1)的表达,激活Wnt信号通路提高β-catenin的转录活性有关。