论文部分内容阅读
研究背景及目的：糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)最常见的,最严重的微血管并发症。DN的发病机制非常复杂。蛋白尿是肾损害的一个标志,也是促进肾脏疾病进展的重要因素。蛋白尿的产生与肾小球滤过屏障足细胞的损伤关系密切。足细胞和足细胞伸出的足突及足突和足突之间的裂孔膜(slit membrane)是肾小球滤过屏障的最外层。日本的学者研究DN患者尿液中的足细胞,并通过研究足细胞的数量来观察足细胞的损伤,然因足细胞和肾小球结构的复杂性,在现行的条件下用光学显微镜来测量足细胞的数量是非常困难的。尿足细胞检测,不适用于临床研究。肾母细胞肿瘤1(WT1)仅表达在足细胞核,参与维持足细胞的功能,是足细胞的特异性标志之一,因此我们选取WT1作为我们的观察指标。
DN据其临床表现及病机特点,属于中医“消渴”、“水肿”、“尿浊”等的范畴。其基本病因为先天禀赋不足,后天饮食不节,劳欲太过及情志失调。近来大多数医家都认为DN的基本病机为气阴两虚,在疾病的发展过程中可伴有血瘀、痰浊(湿)、湿(痰)热等,虚实夹杂,互相影响,共同加重疾病病情。治疗上益气养阴活血类中药起到了较好的疗效。
在既往课题组研究的基础上,本实验通过建立DM大鼠模型,待其发展为DN,采用导师宋纯东教授临床经验方剂益气养阴活血方对该模型进行干预,并通过观察实验大鼠的24h尿蛋白定量,血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG),肾组织病理学形态及肾组织中WT1的表达情况,研究益气养阴活血方对DN的治疗作用及其有效机制,为临床广泛应用益气养阴活血方提供实验基础和理论依据。
方法：选用清洁级雄性SD大鼠60只,适应性喂养一周,随机分为5组：空白组、模型组、代文组、高剂量组和低剂量组,称重后造模各组给予链脲佐菌素(STZ) 45mg/kg单次腹腔注射,空白组给予同等剂量新鲜配制的柠檬酸钠缓冲液腹腔注射, 3天后连续监测血糖,血糖≥16.7mmol/L,尿糖阳性,尿蛋白阳性,尿量大于正常组150%者为造模成功。成模后空白组和模型组灌服生理盐水(1ml/100g),代文组按1.67mg/200g•d灌服给药,高剂量组、低剂量组按成人用药量的12.5倍、6.25倍给药,各组共给药6周。6周后,观察益气养阴活血方对DN大鼠的一般情况,肥大指数, 24h尿蛋白定量、Scr、BUN、ALB、ALT、TC、TG和FBG等生化指标的影响。同时PAS染色光镜下观察肾脏病理变化,免疫组化检测肾组织中WT1的表达。
结果：益气养阴活血方能够改善实验大鼠的一般情况。肥大指数方面,空白组与各造模组之间均存在显著性差异(P<0.01),代文组(5.56±0.35)与高剂量组(3.92±0.35)、低剂量组(4.61±0.39)比较有差异(P<0.01)。
实验结束时各造模组大鼠的ALT、BUN、Scr均无显著性差异(P>0.05)。空白组ALB与各造模组比较,有显著性差异(P<0.01)；代文组(18.28±0.90)与模型组(16.99±0.69)比较有差异(P<0.05),与高剂量组(21.80±1.16)、低剂量组(20.81±0.99)比较有显著性意义(P<0.01)；高、低剂量组比较,无显著性差异(P>0.05)。在TC方面,空白组(1.39±0.26)与代文组、模型组、低剂量组相比,有显著性差异(P<0.01),与高剂量组(1.62±0.09)无差异(P>0.05),代文组(2.08±0.20)与模型组(2.09±0.22)无显著性差异(P>0.05)。空白组(1.12±0.38)的TG与各造模组有显著性差异(P<0.01或P<0.05),代文组(3.32±0.37)与模型组(3.60±0.68)无差异(P>0.05)。空白组大鼠的24h尿蛋白定量(0.0371±0.0166)与高剂量组(0.0553±0.0075)比较无明显差异(P>0.05)；代文组(0.0834±0.0167)与低剂量组(0.0802±0.0121)无明显差异(P>0.05)。
免疫组织化学结果：WT1 在各组足细胞细胞核表达,与空白组比较,造模组WT1的表达明显减少,具有显著性差异(P<0.01)；造模各组中模型组WT1的表达最少,与代文组、高剂量组、低剂量组的差异有显著性意义(P<0.01)。
结论：1.益气养阴活血方可以减少尿蛋白,保护肾功能。
2.益气养阴活血方可以抑制DN大鼠的肾小球毛细血管基底膜的增厚、系膜基质增生及足细胞的病变,延缓肾脏病理的进展。
3.益气养阴活血方可以影响肾组织中WT1的表达。