受体特异性骨髓干细胞诱导肝移植大鼠长期存活

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目的:研究受体特异性骨髓干细胞在大鼠移植肝中的诱导分化情况及对大鼠长期存活的影响。 方法:用双袖套法建立大鼠原位肝移植模型,供体为雌性Wistar大鼠,受体为雌性SD大鼠;从雄性SD大鼠骨髓中分离出全骨髓细胞、间充质干细胞、造血干细胞,作为受体特异性细胞;实验分空白对照组(A组)、D-hanks液组(B组)、全骨髓细胞组(C组)、间充质干细胞组(D组)、造血干细胞组(E组)。A组仅行原位肝移植术;B组术后门静脉注射D-hanks液0.5ml;C组、D组、E组术后分别在门静脉注射各种雄性SD大鼠骨髓细胞0.5ml(5×10~5个/mL)。受体大鼠均给予亚治疗剂量的环孢素A(cyclosporine A,CsA)(0.25mg/kg,肌注,1次/天×14天。术前一天开始)。术后60天、90天对移植肝组织进行雄性性别决定基因Sry原位杂交,及Sry原位杂交结合白蛋白、甲胎蛋白免疫组化的双标技术,计算Sry阳性细胞百分率及双阳性细胞百分率;观察各组大鼠的中位生存时间(Median survival time,MST)、肝功能(ALT、TBil)及病理变化。 结果:(1)Sry阳性细胞百分率(移植细胞替代率)C组、D组、E组术后60天分别为(62.70±1.79)%、(62.50±1.60)%、(32.38±1.41)%),术后90天分别为(63.88±1.99)%、(63.50±2.27)%、(32.88±1.55)%,C组、D组的替代率无显著差异(P>0.05),但都明显高于E组,有显著性差异(P<0.05);各组术后60天和90天,替代率无明显差异(P>0.05)。(2)Sry原位杂交结合甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、白蛋白免疫组化双阳性细胞百分率(有肝细胞功能的细胞)C组、D组、E组术后60天分别为(51.62±1.16)%、(55.53±2.32)%、(23.28±1.55)%,(55.34±1.36)%、(56.83±2.32)%、(25.78±1.55)%);术后90天分别为(54.13±1.58)%、(54.60±1.85)%、(25.26+2.67)%,(54.26士2.58)%、(55.10士2.45)%、(26.16士1.67)%。C组、D组双阳性细胞百分率无显著差异(P>0.05),但都明显高于E组,有显著性差异(P<0 .05);各组术后60天和90天,双阳性细胞百分率无明显差异 (P>.05)。(3)C组、D组、E组中位生存时间(Median survivalt而e,MsT)分别为(MsT>18o天,n=8)、(MST>18o天,n=8)、(MST=102天,n=s)比A组、B组(MST=12天,n=8)、(MST=10天,n=8)明显延长,有显著差异(P<0.05);C组、D组比E组明显延长,有显著差异 (P<0.05);C组、D组L匕较无显著性差异(P>.05);A组、B组比较无显著性差异(P>0.05)。(4)移植术后1周各组血清ALT、TBil均较正常值增高(P<0.05),C组D组、E组明显低于A组、B组,有显著差异(P<0.05);C组、D组无显著差异(P>.05),但都明显低于E组;有显著性差异(P<0.05);A组、B组有显著性差异(P<0.05)。(5)病理表现:术后10天A组和B组均呈急性中重度排斥反应,移植术后60天、90天C、D、E各组均无明显的急性排斥反应。 结论:(l)受体特异性骨髓干细胞门静脉输注能减轻急性排斥反应,诱导大鼠肝移植术后长期存活;(2)受体特异性骨髓干细胞能在移植肝的环境中诱导分化为肝细胞,表达白蛋白和甲胎蛋白,并逐渐替代移植肝本身的细胞;(3)其中间充质干细胞的效果优于造血干细胞,在移植肝内诱导分化为肝细胞并替代的能力较强;(4)移植的肝脏逐渐被受体特异性骨髓干细胞分化来的的肝细胞替代,转变为与受体基因类似或相同的器官,实现供体器官受体化是移植的肝脏不被排斥而长期存活的可能原因。
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