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转基因技术是生物研究的重要技术之一，然而大多数转基因动物的生产均用到筛选标记基因，筛选标记基因的引入很大程度上限制了转基因动物的发展。本实验将通过PCR克隆得到的Fat-1基因，合成的attB、Loxp序列并克隆入pEGFP-N1框架载体，得到可删除筛选标记基因的pEGFP- N1-Fat-1真核表达载体；体外转录合成phiC31整合酶mRNA与线性化的pEGFP- N1-Fat-1载体通过电转染方法共转染绵羊胎儿皮肤成纤维细胞， G418筛选得到表达绿色荧光的单克隆细胞系；再利用 pET-28a- His-NLS-TAT-Cre质粒诱导表达Cre重组蛋白，将纯化后的Cre穿膜肽转入表达绿色荧光的单克隆细胞系中，将荧光淬灭的细胞系扩繁，提取基因组DNA并进行PCR及测序鉴定，得到无标记转Fat-1基因绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系。 具体实验结果如下： ①构建了添加有attB序列和两个同方向Loxp序列的pEGFP-N1-Fat-1表达载体。 ②成功在体外转录合成了phiC31整合酶mRNA，并介导了pEGFP-N1-Fat-1表达载体整合入绵羊胎儿皮肤成纤维细胞基因组的假attP位点。 ③成功诱导出Cre穿膜肽，并且将转基因细胞中的标记基因切除掉，最终获得了安全的无标记转Fat-1基因的细胞系。