【摘 要】
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荷叶主要用于治疗脾虚泄泻、暑湿泄泻、暑热烦渴、便血崩漏等症状。荷叶碱是从荷叶中提取的异喹啉类生物碱,具有广泛的药理活性,包括抗癌、抗炎、抗氧化、降脂减肥、抗病毒、促进免疫、维护肠道菌群稳态等多种功能,特别在肠道保护中具有重要作用。因此,本课题研究了荷叶碱对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠肠炎模型的保护作用,为肠炎新药的研发以及中药基本作用机理的研究等提供依据。本研究通过脂多糖（LPS）建立小鼠巨噬细
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荷叶主要用于治疗脾虚泄泻、暑湿泄泻、暑热烦渴、便血崩漏等症状。荷叶碱是从荷叶中提取的异喹啉类生物碱,具有广泛的药理活性,包括抗癌、抗炎、抗氧化、降脂减肥、抗病毒、促进免疫、维护肠道菌群稳态等多种功能,特别在肠道保护中具有重要作用。因此,本课题研究了荷叶碱对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠肠炎模型的保护作用,为肠炎新药的研发以及中药基本作用机理的研究等提供依据。本研究通过脂多糖（LPS）建立小鼠巨噬细胞（RAW264.7）炎症模型,并检测荷叶碱治疗前后细胞培养液中一氧化氮（NO）和促炎细胞因子TNF-α、IL-6的含量,验证荷叶碱的体外抗炎作用效果。随后进行动物试验,将雄性Balb/c小鼠随机分成5组,每组10只,分别为空白组（Control）、荷叶碱高剂量治疗组（H-Nuc+DSS）、荷叶碱低剂量治疗组（L-Nuc+DSS）、DSS组（DSS）和荷叶碱对照组（Nuc）,用5%的DSS连续诱导7 d构建小鼠肠炎模型。荷叶碱高、低剂量治疗组腹腔注射20 mg/kg和10 mg/kg荷叶碱,每天1次,连续7 d。记录模型构建及治疗期间小鼠体重变化。试验结束后,解剖小鼠,取结肠、肠系膜淋巴结、Peyer淋巴结（PP结）、脾脏、结肠内容物保存备用。测量结肠长度,评估疾病活动指数（DAI）,制作结肠组织病理切片并观察。通过MTT法检测脾脏和肠系膜淋巴结中T细胞含量;流式细胞术检测肠系膜淋巴结CD3+、CD4+、CD8+细胞数量,脾脏Th1、Th2、Th17和Treg以及PP结B220、Ig A含量;采用16S r RNA测序的方法对小鼠的肠道菌群进行比较分析。研究结果如下:1、体外细胞试验结果显示,LPS处理后可显著增加NO和促炎细胞因子TNF-α、IL-6的含量（P＜0.05）。而经荷叶碱干预24 h后,与LPS组比较,不同浓度的荷叶碱均可以在一定程度上逆转这种情况。结果表明,荷叶碱对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症模型具有较好的抗炎效果。2、荷叶碱高、低剂量治疗后可以缓解DSS诱发的小鼠结肠炎,显著改善小鼠整体状态,降低DAI值、改善病理特征。荷叶碱可以促进脾脏和肠系膜淋巴结中T细胞增殖。流式细胞术结果表明,荷叶碱可以增强由DSS诱导的肠道炎症中B220和Ig A细胞含量,通过调节CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th17/Treg平衡治疗由DSS诱导的肠道炎症。3、通过16S r RNA测序发现,在门水平上,DSS诱导肠炎后DSS组中的厚壁菌门（Firmicutes）和放线菌门（Actinobacteria）丰度减少,拟杆菌门（Bacteroidetes）丰度增多,在不同浓度的荷叶碱治疗后肠道中Firmicutes和Actinobacteria丰度趋向正常的对照组。在属水平上,与对照组相比,DSS组毛螺菌属（Lachnospiraceae）、嗜胆菌属（Bilophila）、嗜盐单胞菌属（Halomonas）的数量减少,拟杆菌属（Bacteroides）、副杆菌属（Parabacteroides）、副螺旋菌属（Parasutterella）的数量增加,经不同浓度的荷叶碱治疗后均逆转了这一趋势。总之,荷叶碱能够显著改善DSS诱导的肠炎小鼠肠道炎症反应,其作用效果可能与调控肠道菌群,促进Th17/Treg、Th1/Th2免疫轴平衡有关。
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