山西太谷酿酒葡萄黑脚病病原菌的分离与鉴定

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病害一直是造成作物产量损失的主要原因之一,几乎所有作物在生长期内都会遭到不同程度的危害,造成极大的经济损失。怎样有效地防治植物病害,减少损失,是农业生产的当务之急。其中,对病害病原的分离鉴定,观察了解病原对寄主的侵染是病害防治的基础性工作,可以更好地了解病害发生的规律、植物感病的机理,对植物病害的防治具有指导作用。 山西太谷及临近地区是我国的一个著名的葡萄产区,生产优质葡萄。山西怡园酒庄有限公司葡萄园从2002年开始,首先在美乐(Vitis vinifera cv.Merlot)品种上发现了生长不良的现象,主要表现为:春季地上部部分或全部新梢生长势弱,叶小、叶缘水渍状或出现边缘干枯,入夏后症状有所缓解,但葡萄果实的产量和品质都受到明显影响,并造成植株的进一步衰弱,次年病害发生更为严重。地上部新梢和叶片没有观察到病虫害危害的迹象,对根系的观察表明,这些植株根系须根少,未观察到根系害虫活动,对大根进行横截后可观察到褐色的坏死组织延伸至木质部中央,纵向去除表皮和韧皮部后,可见椭圆形的褐色病斑,病斑发生的方向和地上部出现症状的新梢方向有一致性,病斑发生的数量与严重程度也与地上部症状的表现程度相一致。因此,认为是根系病害的侵染,导致植株地上部出现症状。 通过病原菌分离、形态学鉴定分析、回接验证,初步认为是柱孢属(Cylindrocarpon)真菌引起的病害。利用ITs区域、β-维管蛋白片段区域(Bt1,Bt2)、线粒体小亚基核糖体(mitochondrialsmall subunit ribosomal,mtSSU rDNA)片段这四个保守区域对分离到的致病真菌菌株进行分子鉴定,同时利用MEGA3.1软件包构建系统进化树。研究结果表明,本研究分离到的柱孢属菌株Cylindrocarpon sp.ITS区域序列片段(545bp)、mtSStJ rDNA片段(629bp),以及Bt1片段(533bp)与C macrodidymum相应区域有极高的相似性,均达到99%;而长度为286bp的Bt2片段与C.destructans相似性较低,相似率为83%,因此判断Cylindrocarpon sp.既不完全属于Cmacrodidymum,也不完全属于C. destructans。结合形态学观察比较和病原回接鉴定的结果,研究确认造成山西太谷地区美乐葡萄黑脚病的病原为柱孢属真菌,所分离得到的致病菌株可能是C.macrodidymum删的一个变种C. macrodidymum var.taigunesis。
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