论文部分内容阅读
hPinl是一种肽基脯氨酰顺反异构酶，能特异催化蛋白质分子中pSer/Thr-Pro肽键的顺反构型转变，与多种人类疾病相关，尤其是癌症和阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease，AD)。利用Ecoli BL21原核表达纯化得到了His-hPinl融合蛋白，用重组肠激酶酶切除去组氨酸标签得到hPinl。首次借助SDS-PAGE、紫外差吸收光谱、内源荧光光谱、圆二色谱法和PPIase酶活测定等方法研究了hPinl的热稳定性，以及Al<3+>与hPinl的相互作用．。
在中性条件下不同温度处理后，SDS-PAGE分析表明，低于50℃处理不会影响His-hPinl或hPinl的溶解性，60℃～100℃处理会使其部分变性而沉淀。内源荧光发射光谱研究表明，未热处理的His-hPinl和hPinl都具有约340nm的荧光发射峰；热处理使荧光发射峰的位置发生一定改变，低于40℃处理对hPinl的荧光强度影响较小，50℃～100℃热处理使hPinl的荧光强度明显降低。圆二色谱研究表明，热处理对hPinl的二级结构有显著影响，引起α-螺旋含量的明显减少，而无规卷曲增加。低于40℃热处理不会影响hPinl的异构酶活性，而50℃以上热处理导致hPinl的异构酶活性降低。以上结果表明hPinl是一个相对热稳定的蛋白。
紫外差时间扫描光谱检测到Al<3+>-hPinl体系的LMCT带，吸光值随时间增加而增加。内源荧光光谱可知，随着Al<3+>的加入，hPinl的内源荧光发生淬灭，双分子淬灭常数K<,q>为9.14×10<11>(mol/L)<-1>·S<-1>，内源荧光的最大发射波长λ<,em,max>发生红移，说明色氨酸残基逐渐暴露于溶剂当中，hPinl分子构象发生一定改变。圆二色谱研究表明Al<3+>的结合使hPinl的二级结构发生一定改变，表现为α-螺旋减少，β-折叠和无规卷曲增加。另外，Al<3+>使hPinl的异构酶活性降低。以上结果表明，由于Al<3+>的结合，影响了hPinl的结构，导致其PPIase活性降低。由Al<3+>引起hPinl的活性降低也许是AD病发的一个潜在因素。