基于压力信号读出的有机小分子快速检测方法研究

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随着科学技术的发展和小分子生物功能认识的不断深入,对有机小分子的检测提出了更高的要求,目前的检测方法基本都是基于光学、磁或电化学分析方法,这些方法虽然为人们提供了准确的检测结果,但由于需要精密的大型仪器及专业的操作人员,增加了实验复杂性和检测成本,限制其推广和应用,因此更加迫切需要高灵敏度、快速且操作简单、成本低廉的小分子检测工具或手段。压强,一种简单的物理信号,可通过日常生活中常见的压力计进行检测。而众所周知的是,当气体生成并从溶液中释放出来时,可实现从液体到气体23个数量级的体积膨胀,导致密闭体系中的压力骤增。换句话说,基于产气反应的压力信号快速检测策略设计,还同时兼具信号放大作用,必将具有极高的分析灵敏度。总而言之,基于压力信号变化的快速检测策略,通过简单压力信号输出,易于实现分析设备的微型化,为发展便携式检测工具,实现快速现场分析提供了新的思路。基于以上认识,本文通过抑制催化产气反应引起显著压力值的变化作为信号探针,分别以抗生素多粘菌素(33)(PMB)、非法添加剂三聚氰胺(Mel)和天然存在的精胺(Spm)为研究对象,通过简单压力信号读出建立了上述三种有机小分子的快速检测新方法,具体研究内容如下:Ⅰ基于PtNPs催化活性抑制的压力信号读出用于PMB。铂纳米颗粒(PtNPs)具有催化过氧化氢(H2O2)分解为水(H2O)和氧气(O2)的能力,在封闭体系中O2大量生成能引起体系压力增加,压力信号可由简单数字压力计监测。当有多粘菌素B(PMB)分子存在时,PMB在PtNPs之间起到电荷屏蔽和分子桥联作用,双重作用导致了PtNPs的聚集以及催化活性抑制。通过考察有没有PMB存在下压力信号的变化值(ΔP)与PMB浓度之间的关系,构建了基于压力信号读出的PMB的快速检测方法,该方法在0.05~1.0mM范围内具有良好的线性关系,检测限(3s)为28.6 n M,并成功用于人体尿液和注射粉针剂的检测,注射样品中的PMB加标回收率在87.2%~102.3%之间,相对标准偏差(RSD)在5.9%以下;尿样中的PMB加标回收率在88.2%~102.0%之间,RSD在6.6%以下。这种基于PtNPs催化活性抑制的压力信号读出策略,为药物制剂和生物体液中PMB的检测提供了方便的新选择,具有低成本和高灵敏度的优点。Ⅱ基于Au@PtNPs催化活性抑制的压力信号读出用于现场快速检测Mel。由55个胸腺嘧啶组成的寡核苷酸序列(Poly-55T)吸附的铂包金纳米颗粒(Au@PtNPs)具有优异的催化活性,能够催化H2O2分解为H2O和O2,引起封闭体系中压力增加,压力信号可由简单数字压力计监测。当有Mel分子存在时,Au@PtNPs表面的Poly-55T与Mel形成三重氢键,引起Au@PtNPs聚集催化活性抑制。通过考察有没有Mel存在下压力信号的变化值(ΔP)与Mel浓度之间的关系,构建了基于压力信号读出的定量Mel的快速检测方法,该方法在0.025~10.0mM范围内具有良好的线性关系,检测限(3s)为18.4 nM,并成功用于奶粉样品检测,回收率在89.0%~103.2%范围内,相对标准偏差(RSD)低于6.6%。这种基于Au@PtNPs催化活性抑制的压力信号读出策略,为Mel的快速检测提供了新的方法选择。Ⅲ基于Au@PtNPs聚集的色度和压力双信号读出用于快速检测精胺。铂包金纳米颗粒(Au@PtNPs)既具有铂纳米颗粒的催化能力,又拥有金纳米颗粒的色度信号。由寡核苷酸序列(ssDNA)吸附Au@PtNPs能在高盐浓度下稳定存在,当有精胺(Spm)分子存在时,因其电荷屏蔽和离子桥接的双重作用会导致ssDNA吸附的Au@PtNPs聚集,引起催化活性和溶液颜色同时改变。两种信号分别采用不同的检测手段,压力信号通过简单的数字压力计检测空白体系与加样体系的压力信号变化值(ΔP)来检测,色度信号通过紫外分光光度计测量666 nm和523 nm峰处Au@PtNPs吸光度的比值(A666nm/A523nm)来检测。在相同的Au@PtNPs浓度下,压力信号变化值(ΔP)与Spm的浓度在0.01~1.6mM具有线性关系,检测限(3s)为9.2 nM,并成功用于人体尿液检测,回收率在90.5%~102.6%之间,相对标准偏差(RSD)低于5.6%;色度信号(A666nm/A523nm)与Spm的浓度在0.08~0.6mM具有线性关系,检测限(3s)为16.8 nM,也成功用于人体尿液和牛奶样品检测,回收率在92.3%~102.1%之间,相对标准偏差(RSD)低于3.9%。这种基于双信号的高灵敏、快速定量Spm的快速检测方法,即可用于实验室中,也可用于非实验室场景中样品的分析检测,与传统的色谱和毛细管电泳方法相比,这里描述的方法将为生物流体和发酵产品中Spm的特异性检测提供方便的替代方案和新的思路。上述研究结果,我们相信其对深入认识基于压力信号读出的快速检测策略设计,并进一步开发新的便携式检测工具,以拓展其在环境监测、食品安全、健康护理和生物医学诊断等方面的应用,具有十分重要的意义。
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