海南四种茶水提物的抗氧化及抑菌活性比较研究

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来自世界各地不同品种的茶很多,但同一地域茶之间的比较研究较少。本研究对象为来自海南的鹧鸪茶(MO)、苦丁茶(KD)、大叶种茶(DY)和白沙绿茶(BS)四大海南特有茶品种,并分别比较研究四者的生物活性。本研究通过四种茶的化学成分、以及其体外和体内抗氧化活性和抑菌活性来比较四种茶的生物活性强弱。论文包括以下几个部分:1.采用煎煮法对四种茶进行提取,获得四种茶水提物粉末,并测定四种茶水提物的总多酚含量和总黄酮含量。其中鹧鸪茶水提物的总多酚含量最高,为420.05±25.65 mg GAE/g DW,其次为大叶种茶、白沙绿茶和苦丁茶水提物;苦丁茶水提物的总黄酮含量最高,为691.60±19.47 mg RE/g DW,其次为大叶种茶、白沙绿茶和鹧鸪茶水提物。2.采用六种体外抗氧化方法及酿酒酵母评价四种茶的抗氧化活性以及五种细菌评价茶的抑菌活性。综合六种体外抗氧化活性测试结果,其中清除DPPH自由基、ABTS自由基及高价铁离子还原能力由强到弱的顺序为:鹧鸪茶>大叶种茶>白沙绿茶>苦丁茶;而清除羟自由基、超氧阴离子及总还原能力由强到弱的顺序为:大叶种茶>鹧鸪茶>白沙绿茶>苦丁茶。抑菌活性为:四种茶水提物对五种细菌的抑制具有一定的选择性,大叶种茶水提物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,其MIC为1.56 mg/mL;鹧鸪茶对五种细菌均有较好的抑菌效果,其抑菌活性较为广谱。3.对四种茶水提物进行大孔树脂柱层析以及硅胶柱层析后分别获得四种大孔树脂提物及八个层析物。本实验测定其组分的总多酚含量和总黄酮含量,并运用EPR技术测定其体外抗氧化活性。其中大叶种茶组分中DY-fraction Ⅱ的总多酚含量最高,为669.55±4.74 mg GAE/g DW;DY-fraction Ⅰ的总黄酮含量最高,为 974.22 ± 5.31 mg RE/g DW;DPPH 自由基清除率最强的是 DY-fraction Ⅱ,IC50为4.13±0.70 μg/mL,羟基自由基清除率最强的是BS-fraction I,IC50为0.63±0.17μg/mL,两者均强于阳性对照阿魏酸。4.通过UPLC-PDA-ESI-(-)-HRMS分析了四种茶的成分,鹧鸪茶鉴定出14种化合物,其中含量最高的前三种化合物是槲皮素、1-O-没食子酸-6-O-叶黄素-α-葡萄糖和山奈酚-3-O-洋槐糖苷;苦丁茶鉴定出15种化合物,其中含量最高的前三种化合物是4,5-二咖啡酰奎尼酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸和3,4-二咖啡酰奎尼酸;大叶种茶鉴定出16种化合物,其中含量最高的前三种化合物是咖啡因、表儿茶素没食子酸和表儿茶素;白沙绿茶鉴定出16种化合物,其中含量最高的前三种化合物是咖啡因、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸。5.利用受到H2O2胁迫的野生型酿酒酵母WT及基因缺陷型酿酒酵母sod1△测试四种茶对酵母细胞的保护作用。其结果为:鹧鸪茶在降低细胞内氧化水平,增加过氧化氢酶活性、谷胱甘肽还原酶活性、还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽含量的作用最强。苦丁茶提高细胞存活率,降低细胞脂质过氧化率的作用最强。大叶种茶对超氧化物歧化酶活性的改善效果最好,光晕实验中白沙绿茶活性最高,且两者的POD酶活性较强。6.通过使用细胞抗氧化活性测定(CAA)方法测定四种茶的抗氧化活性。其活性由强至弱的结果为:鹧鸪茶>大叶种茶>白沙绿茶>苦丁茶。此结果与鹧鸪茶的最高含量化合物是槲皮素相关,而大叶种茶的活性比白沙绿茶高在于大叶种茶的表儿茶素没食子酸和表儿茶素含量比白沙绿茶的含量高,且二咖啡酰奎尼酸的抗氧化活性低于前三者。因此,通过综合分析四种茶的生物活性,可知:四种茶均有较强的抗氧化活性,其中鹧鸪茶的抗氧化活性最强,其次是大叶种茶、白沙绿茶和苦丁茶;同时大叶种茶对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强;而鹧鸪茶的抑菌活性较为广谱。以上此结论可作为潜在的天然抗氧化剂开发利用提供科学依据。
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