论文部分内容阅读
第一部分长链非编码RNA LINC01089通过Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌的功能及机制研究目的:在整个人类基因组中,大约有80-90%的DNA可以转录为RNA,但只有不到2%的RNA具有蛋白编码能力。目前越来越多的研究表明,长链非编码RNA与乳腺癌的发生发展密切相关。本实验旨在探讨长链非编码RNA(lnc RNA)LINC01089在乳腺癌中的功能和分子机制。方法:1.下载c Bio Portal数据库的乳腺癌相关数据,分析LINC01089的表达差异与乳腺癌患者生存预后及临床危险因素的相关性。2.RT-q PCR实验分别验证LINC01089在人乳腺癌组织及配对癌旁组织、乳腺癌细胞系和正常乳腺上皮细胞中的表达情况。3.体外实验探究LINC01089在乳腺癌中的相关功能。4.运用Western blot和RT-q PCR等实验探究LINC01089在乳腺癌中调控Wnt/β-catenin信号通路的作用机制。结果:1.LINC01089表达水平与乳腺癌患者的生存期、年龄和有无淋巴结转移显著相关。LINC01089可以作为乳腺癌患者总生存期和无复发生存期的独立预测指标。2.在人乳腺癌组织和细胞系中,LINC01089的表达水平明显下调。3.体外实验表明,过表达LINC01089的乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到显著抑制。此外,过表达LINC01089能促进乳腺癌细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期。在敲减LINC01089的乳腺癌细胞中进行的功能试验也部分验证了上述结果。4.LINC01089通过下调β-catenin的转录水平来抑制Wnt/β-catenin信号通路。结论:长链非编码RNA LINC01089可能成为一种新的判断乳腺癌患者预后的独立预测指标,并作为一种抑癌基因,通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥抑癌作用。第二部分锌指蛋白ZNF582在乳腺癌中的表达及功能研究目的:锌指蛋白家族是哺乳动物中最常见的一类转录因子,其通过与靶DNA或RNA特异性地结合来调节基因在转录和翻译水平的表达。ZNF582是锌指蛋白家族中的一员,也是新发现的一类抑癌基因。本部分旨在探讨ZNF582在乳腺癌中的表达及相关功能。方法:1.通过在线数据库Meth HC和Disease Meth分析ZNF582的表达水平与DNA启动子区甲基化状态的相关性。2.分别通过RT-q PCR和RT-PCR实验验证ZNF582在人乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达情况。3.通过在线数据库Kaplan-Meier Plotter分析ZNF582与乳腺癌患者生存期的关系。4.体外实验探究ZNF582在乳腺癌中的生物学功能。结果:1.通过在线数据库Meth HC和Disease Meth预测发现,ZNF582的DNA启动子区的甲基化水平与其表达水平呈负相关。2.ZNF582在人乳腺癌组织中表达水平明显下调,在部分乳腺癌细胞中微弱表达或不表达。3.通过在线数据库Kaplan-Meier Plotter预测发现,ZNF582低表达的乳腺癌患者10年无复发生存期和无远处转移生存期明显缩短,而总生存期无明显差异。4.通过一系列细胞功能试验发现,ZNF582可以抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。此外,ZNF582的过表达可以促进乳腺癌细胞凋亡,使细胞周期阻滞在G2/M期。结论:锌指蛋白ZNF582在乳腺癌组织中表达下调,并作为新的抑癌基因在乳腺癌中发挥抑癌作用。