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幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)具有专一性、特异性黏附于人的胃黏膜上皮细胞表面的特征,HP具有宿主特异性和组织特异性的原因还不清楚,但确定的是:HP表面的黏附素和人胃部的相对应的受体起到重要的作用。自然界中很难找到灵长类动物以外的可以成为HP自然定植的动物,许多用于致病机理和病理研究的动物模型多有缺点。本实验意图在普通昆明白小鼠体内转入人的相应受体基因,以期在小鼠胃部组织特异性形成针对HP黏附素的受体,从而为HP能自然定植于小型动物的研究做一些探索。
1993年Boren和Falk发现Lewis b血型抗原有助于HP黏附于人的胃部。Lewis b抗原结构可以形成于糖蛋白、糖脂等的末端,在其形成过程中,α-1,3/4-岩藻糖基转移酶参与最后一步酶促反应,它在H-1抗原的末端加上一个以α-1,3糖苷键连接的岩藻糖残基。此酶在人、非洲黑猩猩和小人猿体内存在,但在小鼠体内并没有,因此正常小鼠体内不存在HP赖于黏附的结构之一Lewisb。
为使小鼠胃部组织特异性表达人的a-1,3/4-岩藻糖基转移酶,利于形成Lewis b抗原结构,本实验以昆明白小鼠为动物模型进行组织特异性表达的研究。实验中构建了T-easy-5’+2X+3’+FUT岩藻糖基转移酶基因表达载体。该表达载体包含a-1,3/4-岩藻糖基转移酶基因的完整编码序列,大鼠肝脂肪酸结合蛋白L-FABP启动子,大鼠L-FABP终止子,鸡的两个拷贝的β-球蛋白绝缘子。已有研究表明大鼠L-FABP启动子具有在小鼠胃部启动外源基因的功能。
利用显微注射方法注射原核期小鼠胚胎制备转基因小鼠,F0代Founder animal(创始动物)共获得53只小鼠,用PCR和Southern杂交的方法检测出3只为转基因阳性小鼠,阳性率为4.66%。阳性Founder Line与非转基因小鼠交配所得F1和F2代均能用PCR法检测到α-1,3/4-岩藻糖基转移酶基因阳性小鼠。每一F0代阳性小鼠的后代F1代的阳性率均小于或接近于50%,可见F0代小鼠均为阳性杂合子。F1代阳性小鼠间交配的后代F2代的不完整数据表明,阳性比例升高,但不能达到100%,所以尚需要进一步的交配筛选,以期生成转基因阳性纯合子小鼠。
该基因在小鼠体内在转录和表达水平,以及HP是否能够自然定植于小鼠体内还需要进一步进行检测。
实验结果表明:α-1,3/4-岩藻糖基转移酶基因转入了昆明白小鼠体内,并且在传代过程中比较稳定,有利于建立一个稳定的小鼠群体。为后续的检测提供稳定的动物来源。