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肺癌是严重影响人类健康、发病率居高不下且异质性极高的恶性肿瘤,根据WHO统计显示,每年接近160万人罹患肺癌,接近四分之一的癌症死亡与其相关。其中,肺腺癌占非小细胞肺癌的比例非常大,且不同于鳞状细胞肺癌及大多数与吸烟有关的肺癌病例,肺腺癌在非吸烟者中发病率亦很高。SET作为在多种肿瘤细胞中转录及表达水平发生变化的原癌基因,对生物体内多种生理过程有关键的调控作用,其中包括有丝分裂,RNA转录,蛋白质翻译,染色体复制等。课题组前期通过生物信息学方法,多种靶基因预测软件联合预测,发现miR-21、miR-23a及miR-199b等多种miRNA靶向调控SET基因,构建了Pri-mi RNA21/23a重组慢病毒载体,并在L-02肝细胞中成功表达。但上述mi RNA是否能通过靶向SET基因对肺癌细胞产生生物学影响尚未见诸报道,本论文进一步从多个角度研究miRNA通过靶向调控SET介导肺腺癌发生发展的分子机制。方法:1.基于课题组前期研究筛选出与SET相互作用的3种miRNAs序列,设计合成相应的引物,并培养5种肺癌/正常肺细胞生长至对数生长期,提取细胞总RNA,进行逆转录及实时荧光定量PCR检测,筛选肿瘤细胞相对于正常细胞表达差异最大的miRNA作为下一步深入研究的对象。2.利用生物信息学方法,确认miR-21-5p对SET基因3’UTR有靶向作用后,构建双荧光素酶报告系统表达载体,转染A549细胞,通过荧光素酶相对活性对miR-21-5p与SET的靶向作用量化评估。3.构建miR-21-5p稳定干扰的慢病毒载体,转染A549细胞后得到稳定干扰的细胞株,提取其总RNA,并进行实时荧光定量PCR,从mi RNA水平验证病毒转染情况。4.分别用Western blot、细胞划痕实验、Transwell实验及CCK8实验从细胞水平探索miR-21-5p抑制对肺腺癌细胞A549的生物学影响。上述实验结果可从细胞生物学层面初步说明miRNA通过靶向SET调控肺腺癌发生发展的作用机制。结果:1.实时荧光定量PCR结果显示,A549中的miR-21-5p表达量较肺上皮细胞BEAS-2B及人胚胎肺细胞WI-38显著性提高,结果差异具有统计学意义(p<0.001)。双荧光素酶报告系统结果表明mi R-21-5p与SET3’UTR存在相互作用关系(p<0.001)。TUD21慢病毒载体构建后成功转染A549细胞构建miR-21-5p稳定干扰细胞株。Western blot实验结果表明正常A549细胞中SET的TAF1-α亚基表达缺失,而miR-21-5p稳定干扰的A549细胞中TAF1-α亚基恢复正常表达,表达量相较对照组A549大幅度提高(p<0.05);细胞划痕实验、Transwell实验及CCK8实验结果差异具有统计学意义,miR-21-5p稳定干扰的A549细胞的迁移(p<0.001)、侵袭(p<0.001)及增殖能力(p<0.01)较正常A549细胞均显著性下降。结论:综合以上结果,表明miR-21-5p通过靶向SET基因中的TAF1-α亚基进而在一定程度上调节肺腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移。