【摘 要】
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目的:（1）通过不同方法建立肺纤维化模型,并比较各组成模差异,寻找复制肺纤维化适宜的造模方法（2）通过比较不同造模方法诱导的肺纤维化模型中miR146a的表达差异,探究miR146a在肺纤维化进程中的作用和意义。方法:（1）应用随机数表法将120只C57BL/6小鼠随机分为6组:IN（气管对照）组、IA（低剂量,2 mg/kg）组、IB（中剂量,3.5 mg/kg）组、IC（高剂量,5 mg/kg
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目的:（1）通过不同方法建立肺纤维化模型,并比较各组成模差异,寻找复制肺纤维化适宜的造模方法（2）通过比较不同造模方法诱导的肺纤维化模型中miR146a的表达差异,探究miR146a在肺纤维化进程中的作用和意义。方法:（1）应用随机数表法将120只C57BL/6小鼠随机分为6组:IN（气管对照）组、IA（低剂量,2 mg/kg）组、IB（中剂量,3.5 mg/kg）组、IC（高剂量,5 mg/kg）组、PN（腹腔对照）组、PA（35 mg/kg）组,每组20只。其中IA、IB、IC组一次性气管内注射不同剂量BLM,IN组注射等体积的生理盐水;PA组腹腔内注射BLM 35 mg/kg,2次/周,连续注射4周,PN组注射等体积的生理盐水。各组小鼠造模28天后处死并收集肺组织及血清。（2）记录各组小鼠精神状态、体质量、肺系数、挠鼻次数变化、死亡率变化并统计数据。（3）H＆E及Masson染色评估各组小鼠肺组织的病理学形态改变并行Szapiel评分、Ashcroft评分。（4）ELISA检测各组小鼠血清TGF-β1、PICP、PⅢNP、TNF-α、IL-6表达水平。（5）免疫组化法检测各组小鼠肺组织α-SMA、TGF-β1、Col-I、Col-III表达水平。（6）RT-PCR检测肺组织α-SMA、Col-I、Col-Ⅲ的相对表达量。（7）RT-PCR检测肺组织IRAK-1、TRAF-6、miR146a的相对表达量。结果:（1）一般情况:造模后对照组表现出精神状态好,饮水和饮食正常,体重都有不同程度的增加,肺系数较低,挠鼻次数波动幅度较小,基本无死亡。BLM造模组小鼠在造模后不久出现了不同程度的进食进水减少、体重下降、活动度下降,肺系数较对照组高,挠鼻次数明显增多等情况,其中造模组死亡率最高的是气管造模IC组（P＜0.05）,PA组最稳定,造模7～10天达到死亡率高峰期,造模24～28天后体重下降趋于平稳。（2）肺组织活检:对照组小鼠肺叶色泽鲜亮,轮廓清晰,呈淡粉红色,未见肿胀和出血点。气管造模组随着剂量增加有不同程度的肺组织变形、斑片瘀血。腹腔造模组肺损伤最严重且最均匀。（3）肺系数结果:对照组小鼠肺系数较BLM造模组明显降低,气管模型组随BLM剂量递增肺系数逐渐增加（P＜0.05）。（4）H＆E染色结果:BLM造模28天后,小鼠肺泡结构较阴性对照组明显破坏、肺泡壁显著增厚、伴炎性细胞浸润和成纤维细胞灶的形成,以BLM腹腔造模组最明显,Ashcroft评分最高;气管模型组Szapiel评分随BLM剂量递增而递增（P＜0.05）,但PA组与IC组相比差异不大（P＞0.05）;Masson染色可见各BLM造模组不同程度的胶原沉积,BLM腹腔造模组胶原沉积主要集中于胸膜,气管造模组主要集中于肺门、支气管周围、肺泡间隔。（5）ELISA检测结果:BLM造模组小鼠血清TGF-β、PICP、PIIINP、TNF-α、IL-6表达水平较对照组明显升高（P＜0.05）,其中腹腔模型组表达水平最高（P＜0.01）。（6）免疫组化结果:气管模型组随着BLM造模剂量增加,肺组织TGF-β、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA阳性表达区域呈递增趋势,气管模型组较腹腔模型组阳性表达区域减少,但仍高于对照组（P值均＜0.05）。（7）RT-PCR结果:（1）BLM造模组肺组织TRAF6、IRAK-1、α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲm RNA表达水平明显高于阴性对照组（P＜0.05）,腹腔造模组表达水平最高;（2）miR-146a在BLM腹腔造模组表达水平最低,显著低于BLM气管造模组,阴性对照组较BLM模型组表达水平明显升高（P＜0.05）;结论:（1）腹腔注射BLM 35mg/Kg每周2次连续4周造模法肺纤维化程度最明显,死亡率低,操作简单,是肺纤维化成模的适宜方法（2）miR146a在博来霉素诱导的肺纤维化模型中低表达,其表达趋势与IRAK-1、TRAF-6、α-SMA、Col-I、Col-Ⅲ相反,可能参与肺纤维化的发生发展。
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