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本研究建立了四种针对猪血清中游离脂肪酸、游离氨基酸、游离钙、无机磷的分析方法，目的是为探讨各种因素（饲料、饲料添加剂、品种等）对上述四项指标的影响等相关研究提供可靠手段，结果如下： 1．建立了一种用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法分析猪血清游离脂肪酸（FFA）谱的方法。以人工合成的2-溴-1-甲基吡啶碘（BMP）为衍生偶联剂，9-羟甲基蒽（HMA）为衍生剂，50℃ 30 min条件下一步衍生，形成稳定的脂肪酸衍生产物：9-羟甲基蒽甲酯。色谱分离柱采用Iertsil C8柱，250mm×4.6mmi.d。粒径5μm，柱温：30℃，流速：1ml／min，以乙腈-水为流动相。梯度程序为：0min～12min，93：7（v／v）；12min～17min，86：14（v／v）；17min～45min，100：0（v／v）。荧光检测器检测（激发λ=252nm，发射λ=412nm），样品处理采用改进Dole提取法：以异丙醇-正庚烷-磷酸（2mol／L）（40：10：1）（v／v／v）为抽提液，12种脂肪酸标准品达到较好分离，正常猪血清能分离检测6种饱和与不饱和脂肪酸。最低检测限＜0.4pmol，线性范围：0.8pmol～25pmol，回收率为82.5％～98.3％，批内与批间变异系数分别小于4.1％和7.8％。一次进样，45min完成色谱分离。 2．以邻苯二甲醛（OPA）／3-硫基丙酸（3-MPA）为衍生剂，手动柱前衍生，SUPELCOSILTMLC-DABS柱反相分离，建立了一种猪血清游离氨基酸的高效液相色谱分析法。选用磷酸盐缓冲液（PB）（0.01mol／LpH=7.2）配制流动相，流动相（A）：磷酸盐缓冲液（PB）（pH=7.2）+0.5％四氢呋喃（THF）；流动相（B）：50％磷酸盐缓冲液（PB）（pH=7.2）：35％乙腈：15％甲醇（v／v／v），多级线性梯度程序为（A／B）：0min～4min，85／15→75／25（v／v）；4min～8min，75／25→60／40（v／v）；8min～23min，60／40→45／55；23min～35min，45／55→0／100（v／v）：35min～45min，0／100→0／100（v／v）。荧光检测器检测（激发λ=340nm，发射λ=450hm）。样品处理采用乙醇沉淀蛋白，17000转／min高速冷冻离心20min，取上清液直接衍生进样（不需除去过量衍生剂），45min内分离测定了猪血清中21种游离氨基酸，批内与批间变异系数分别小于3.8％和7.5％，最低检测限＜1pmol，华中农企又贷2001卒硕于彭戈线性范围:10pmol1000pmol，标准加入回收率为58.2%98%。 3.选用乙二胺四乙酸二钠滴定法（E Dl’A NaZ）建立了猪血清中游离钙的分析方法，最低检测限:0.625林澎ml，线性范围:1 .25“留ml640林g/ml，线性相关系数为0.9997，批内与批间变异系数分别小于0.%%和1 .12%，回收率:97.7%1 06.1%。 4.以硫酸亚铁磷铝蓝比色法建立了猪血清中无机磷的分析方法，结果:最低检测限为1.25呵ml，线性范围2.5林留ml320卜岁ml，线性相关系数0.9998，批内与批间变异系数分别小于3.86%和5.6%，回收率:95.3%105.5%。 高效液相色谱（HPLC）法用于分析血清游离脂肪酸，游离氨基酸国外多见报道，国内主要见用于医学上考察某些疾病与血清（血浆）游离脂肪酸、游离氨基酸的相关性，少见用于畜牧兽医的相关研究。本研究建立的两种高效液相色谱（HPLC）法分析猪血清中游离脂肪酸、游离氨基酸，EDTA NaZ滴定法测血钙，磷铝蓝比色法测血磷，方法稳定可靠，可作为这四项指标的常规分析方法，为动物营养学中饲料及饲料添加剂的使用效果评价、作用机理的研究，以及其它的畜牧兽医相关研究提供手段和方法，因此具有一定的学术、经济意义。