【摘 要】
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口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)引起的急性、烈性传染病,主要感染牛、羊及猪等偶蹄动物。口蹄疫流行地区,灭活疫苗
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口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)引起的急性、烈性传染病,主要感染牛、羊及猪等偶蹄动物。口蹄疫流行地区,灭活疫苗免疫是防控疫情的关键措施,而灭活疫苗要发挥作用的关键,是确保FMDV颗粒的完整,即146S粒子的完整。然而146S粒子稳定性较差,温度升高或pH发生变化时会使146S分解为12S粒子,导致灭活疫苗免疫失败。于是研究者们根据146S粒子分子结构的研究成果,尝试通过氨基酸残基替换来提升FMDV的酸、热稳定性,进而为筛选候选疫苗毒株提供技术支持。本研究在先前的研究基础上,选取了疫苗种毒O/GX/09-7毒株的结构蛋白VP1的17位及VP2的93位氨基酸残基作为替换位点。利用设计的突变引物,成功扩增出含碱基突变的O/GX/09-7毒株P1区序列。成功将目的片段插入到T载体,构建8种克隆质粒,成功将目的片段插入到本实验室已构建好的FMDV载体p43-CHA90-Vector上,构建出8种重组质粒。利用8种重组质粒及感染性克隆pOZK/93转录出病毒基因组RNA并且转染进入BHK-21细胞中,成功拯救出2株病毒vOZK/93和vOS93H。对病毒vOZK/93和vOS93H及亲本毒株O/GX/09-7分别进行酸、热处理,测量处理后病毒的TCID50的值及146S粒子含量,并与空白对照进行比较,研究氨基酸替换对O/GX/09-7毒株稳定性的影响。结果显示,vOZK/93和vOS93H两株病毒的热稳定性均与O/GX/09-7毒株相似,没有明显变化。病毒vOZK/93的酸稳定性与O/GX/09-7毒株相似,但突变病毒vOS93H的酸稳定性与O/GX/09-7毒株相比,有一定的提高,初步达到试验预期目的。
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