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背景及目的肺癌是全球死亡率最高的恶性肿瘤,吉非替尼、厄洛替尼、奥希替尼等靶向药物在肺癌的药物治疗方面取得了突破性进展。大多数靶向药物在不同患者中体内暴露量和药动学参数存在较大个体差异,且部分靶向药物暴露量与药物疗效和/或不良反应的之间有较强的相关性。基于治疗药物监测（TDM）的个体化用药可能是提高肺癌患者表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）治疗效果,同时降低不良反应的有力工具。然而,常规TDM要求患者在特定时间到医院进行血样采集,给患者带来诸多不便;且COVID-19病毒肆虐全球,常规血样采集方式增加了患者和医护人员感染的风险。干血斑（DBS）采样方法有望解决以上问题,患者可以在家采集指尖血到滤纸卡上,然后将干血斑卡常温邮寄到医院或者第三方分析测试中心完成TDM检测。本研究旨在建立人血浆和干血斑中七种酪氨酸激酶抑制剂（吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼及其代谢物AZ5104、安罗替尼）的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）的药物浓度测定方法,经方法学验证成功后应用于临床血药浓度监测,为肺癌靶向药物临床个体化用药奠定基础。方法1.使用AB SCIEX ExionLCTM AD超高效液相色谱串联QTRAP（?） 4500三重四级杆质谱仪,Agela Venusil MP C18色谱柱（2.1 mm × 100 mm,3 μm）进行分析,流动相组成为0.01%的甲酸和10 mM乙酸铵水溶液—乙腈溶液,总运行时间为7分钟,流速为0.3 mL·min-1,柱温40℃,进样量5μL。质谱分析使用电喷雾离子源,采用正离子多反应监测模式检测分析物。2.血浆样品采用甲醇沉淀蛋白方法进行样品前处理,DBS样本用甲醇溶液超声的方法提取分析物。按照《中国药典2020年版生物样品定量分析方法验证指导原则》进行方法学验证,包括分析方法的选择性、定量下限、线性范围、准确度、精密度、基质效应、提取回收率和稳定性,DBS方法还包括红细胞比容、不同加样体积和打孔位置的方法学验证。3.将建立的血浆测定方法用于44例非小细胞肺癌（NSCLC）患者的稳态血浆药物浓度的测定和临床试验中8例胆管癌（BTC）患者不同治疗周期的39份样本的血药浓度监测。4.采集23例NSCLC患者的指尖血和静脉血样本,将建立的干血斑测定方法用于指尖血和静脉血的血药浓度测定。采用Pearson相关系数、Deming回归分析和Bland-Altman法评价静脉血浆浓度与DBS药物浓度的相关性和一致性。结果1.血浆方法吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼及其代谢物AZ5104的线性范围是1-1000 ng·mL-1,安罗替尼的线性范围是0.2-200 ng·mL-1,线性相关系数均大于0.99。批内和批间的准确度相对误差（RE）在-12.17%至13.90%之间,精密度的相对标准偏差（RSD）小于9.42%。基质效应RSD小于10.02%,提取回收率范围在82.05%到103.05%之间,符合指南的要求。2.应用建立的测定方法检测了 44例接受上述TKIs治疗的NSCLC患者血浆样本,其中安罗替尼28例,吉非替尼1例,埃克替尼7例,阿法替尼1例,达克替尼1例,奥希替尼6例。结果表明埃克替尼、奥希替尼和安罗替尼的血浆浓度都存在较高的个体间变异性。3.进一步将血浆分析方法应用于胆管癌患者中安罗替尼的TDM,共收集了来自8例BTC患者不同治疗周期的39份血液样本。安罗替尼连续用药2周的蓄积指数（Rac）为7.02（2.65-12.44）,表明多次给药后安罗替尼血药浓度存在明显的蓄积。且患者个体间的药代动力学变异大,谷浓度（Ctrough）变异系数（CV）为47.5%,并且安罗替尼高暴露量与患者的不良反应的发生可能有关。4.DBS分析方法中厄洛替尼和埃克替尼的线性范围是5-5000 ng·mL-1,吉非替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼及其代谢物AZ5104和安罗替尼的线性范围是5至1000 ng·mL-1,线性相关系数均大于0.99。批内和批间准确度的RE在94.43%-113.19%之间,精密度的RSD小于9.41%。DBS样品可以在室温储存一个月,红细胞比容、不同加样体积和打孔位置不会影响测定的准确度和精密度。5.应用建立的DBS检测方法测定了 23例NSCLC患者的DBS样本浓度,并与常规静脉取样的血浆方法的进行对比分析。DBS方法与血浆方法血药浓度之间的Pearson相关系数为0.97;Bland-Altman图显示,从DBS药物浓度估算的血浆浓度和实际测定的血药浓度之间的偏差为-2.9%,87%的样本偏差小于20%,DBS方法与血浆方法有较好的相关性和一致性。结论开发和验证了简单、快速的UPLC-MS/MS方法,用于同时定量人血浆和干血斑中7种酪氨酸激酶抑制剂的血药浓度,可用于日常临床实践中肺癌靶向药物的TDM。DBS采样方法可能是一种非常有前景的TDM工具,与常规静脉采血监测结果有较好的一致性。