新城疫是由新城疫病毒引起、侵害对象主要为鸡和火鸡的一种急性、热性、败血性、接触性传染病。因新城疫的普遍存在性,以及四季均可发生的流行性,现已成为危害世界禽类养殖最严重的疾病之一。因此,对新城疫进行流行病学检测,以及对其疑似病例做出快速而准确的诊断,进而掌控新城疫的遗传变异规律,对于保护消费者的生命安全,发展禽类养殖业以及减少经济损失具有非常重要意义。新城疫病毒传统的确诊方法主要依赖病毒的分离鉴定及血清学检测(主要包括鸡胚中和试验、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验等方法),这些方法通常耗时长、灵敏度低且经验依赖性强。在中国,根据新城疫诊断的国家标准要求,新城疫病毒的主要检测方有:临床诊断、血凝试验、血凝抑制试验、致病指数测定、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)五种检测方法.但其中临床诊断法受疑似感染病例的不同而存在较大个体差异,同时检测人员的诊断经验与观察习惯都对诊断结果有很大影响。因此临床诊断只能作为新城疫病毒疑似病例的初步判断。而血凝、血凝抑制和致病指数测定都存在实验操作复杂、实验周期长、假阳性率较高的缺点。反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法是一种快速准确的检测方法,但产物需经琼脂糖凝胶电泳和EB染色等,易产生污染和假阳性.在禽类养殖的迅速发展的当下,需要建立一种快速、准确、高效的检测方法,以及时发现和控制保护消费者食用安全,减少经济损失。本研究所建立针对于新城疫病毒的Taq man 一步法QRT-PCR检测方法是在传统RT-PCR检测方法的基础上添加Taq man荧光探针,通过利用荧光定量PCR仪对荧光信号的收集来实现对PCR的全程实时检测,最终结果通过制定标准曲线对未知浓度的模板实行定量解析。通过本研究证明该方法相较于传统方法而言具有更高的灵敏度,特异性和更强的稳定性。本研究还将建立及优化后的检测方法应用于临床样品检测。经过与传统方法的对比检测结果,证明该方法可以用于临床样品的检测。本研究分为两个部分进行研究:新城疫病毒一步法QRT-PCR检测条件优化。将新城疫病毒标准样品通过SPF鸡胚培养法进行培养并提取,在检测其纯度与完整性合格后用作检测模板。通过查阅相关文献,设计一对新城疫病毒的特异性引物与探针,在基础反应体系的上,通过筛选确定四项优化因素:逆转录酶、dNTP、Mg2+、Taq酶,利用正交试验确定每种因素的最优反应条件及个因素之间交互作用,并建立针对新城疫病毒检测的一步法qRT-PCR检测条件.新城疫病毒新型荧光实时定量检测试剂的组装及研制。在第一部分检测方法及各项条件优化的基础上,研制了一种城疫病毒新型荧光QRT-PCR检测试剂盒,对组装的试剂盒进行了各项指标如特异性、稳定性、灵敏度、重复性、保存期等的验证性试验,获得了丰富的试验数据。此外,将符合质量要求的试剂盒应用于实验室的临床样品检测,获得了重要的临床应用数据。这些研究数据都充分证明了本研究所组装的新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒具有快速简便、灵敏度高、特异性强、检测性能稳定等优点,在我国新城疫病毒的检测与检测中具有巨大的应用价值,可推广使用。