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香蕉是多年生常绿大型草本植物,是重要的热带、亚热带经济作物之一。目前,全世界已有130个国家、地区生产香蕉。与其它植物相比,利用香蕉开发转基因植物反应器具有其独特的优势:1) 生长周期较短(一年左右);2)香蕉营养价值高,是大多数人均喜爱的水果,市场消费量大;3) 价格便宜;4)香蕉可以生食,若表达口服疫苗,产品可以供人们直接口服,不需分离提取或加热处理,具有非常大的优势。由此可见,转基因香蕉生物反应器的研究和开发将具有广阔的应用前景。本研究通过SDS法从香蕉幼嫩叶片中提取基因组DNA,根据GenBank报道的ACS启动子序列设计引物,通过PCR的方法对ACS启动子2.5kb的序列进行缺失改造,克隆到了长1200bp的ACS启动子片段,与GenBank报道序列相比较同源性为93.2%。经PlantCARE软件分析发现序列中含有多种调控元件,经预测ACS启动子可能被光、热、GA、乙烯或伤所诱导。为验证其果实特异表达活性,通过插入到pB[101.2中间表达载体上的GUS基因5’端前,构建了含GUS基因的瞬时表达载体pBACS。用基因枪法将pBACS转化到香蕉果实中,结果表明:用pBACS包被的金粉轰击的果实经GUS组织化学染色后,都出现兰色斑点,对照没有出现兰色斑点。因此认为GUS基因在香蕉果实成功实现瞬时表达。不同的靶距离条件下,基因枪转化效率不同,采用3cm、6cm、9cm三个不同的靶距离,每个处理轰击两枪,发现当靶距离为9cm时转化率最高,为62.5%,并且当靶距离在3cm~9cm之间递增时,转化率呈上升趋势。因而,靶距离为9cm是基因枪转化香蕉果实外植体较合适的轰击。 乙型肝炎是由乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)引起的全球性传染病,据估计,全世界目前大约有3.5亿个乙肝病毒感染者,且这一数字还在增加。HBV属嗜肝病毒家族,可引起急性肝炎、慢性肝炎和肝硬化,而且与肝癌的发生有密切的关系。乙型肝炎病毒慢性感染目前尚无有效的抗病毒治疗方法,但其血源疫苗和重组疫苗均能有效的预防乙型肝炎病毒的感染,故疫苗的研制与生产成为了防治这一病毒的重要武器。本研究通过改进的酚-氯仿提取法从乙肝病毒感染者的血清中提取总DNA,然后根据报道的序列设计特异性引物,同时在华南热带农业大学硕士学位论文上游引物中引入了Kozak序列,经那R克隆到、Bs匆基因序列,长度为681bP·NcBIB认sT分析的结果表明,获得的HBsAg基因序列及推导的氮基酸序列与GenBank中所报道的序列的同源率分别为97 .2%和97 .4%。 实珍沙卜源基因在香蕉树果实中表达离不开一个合适的表达载体.为此,本研究将经过改造的HBsAg基因替代pBAcs中的Gus基因,成功构建了含有Acs启动子和HBsAg基因的香蕉树果实表达载体,为下一步转化香蕉,获得在果实中表达几HBsAg蛋白的转基因植株莫定了基础.