【摘 要】
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以建立沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌双重Taq Man PCR方法为例,阐述Taq Man PCR方法建立的系统步骤和关键要素为目的,采用根据沙门氏菌Fim Y和单核细胞增生李斯特菌iap基因
【机 构】
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武汉产品质量监督检验所,国家饮料及粮油制品质量监督检验中心
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以建立沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌双重Taq Man PCR方法为例,阐述Taq Man PCR方法建立的系统步骤和关键要素为目的,采用根据沙门氏菌Fim Y和单核细胞增生李斯特菌iap基因序列利用ABI primer express 3.0软件设计了物种特异性引物和Taq Man探针,采用标准曲线优化法对双重反应体系中引物和探针、Mg2+、d NTP浓度和Taq酶用量以及热循环条件等关键要素进行了优化,借助单双重PCR比较试验、多重PCR高低丰度模板抑制试验、灵敏度、特异性和重复性试验对建立的方法进行
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