茶树紫黄素脱环氧化酶基因的体外定点突变及其突变体的表达和活性鉴定

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：triyve

【摘要】

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经Swiss-Prot蛋白质数据库中查询发现茶树紫黄素脱环氧化酶(VDE)蛋白结构中含有lipocalin特征区，利用重叠延伸法把该特征区中最保守的Gly(GGG)和Trp(TGG)分别定点突变为Leu(TT

【作者】

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韦朝领江昌俊陶汉之宛晓春

【机构】

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安徽农业大学农业部茶叶生物技术重点开放实验室

【出处】

：

中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

：

2004年1期

【关键词】

：

茶树紫黄素脱环氧化酶定点突变表达生物活性 Camellia sinensis violaxanthin de-epoxidase site-direc

【基金项目】

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农业部农业结构调整重大技术研究专项 (No .2 0 0 2 12 0 2A),安徽省教育厅高等学校青年教师科研资助计划资助项目 (No.2 0 0 3JQ10 9)~~

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经Swiss-Prot蛋白质数据库中查询发现茶树紫黄素脱环氧化酶(VDE)蛋白结构中含有lipocalin特征区，利用重叠延伸法把该特征区中最保守的Gly(GGG)和Trp(TGG)分别定点突变为Leu(TTG)和Tyr(TAG),构建了表达载体pET-32a／G→L和pET-32a／W→Y，在E．coli BL21 trxB(DE3)进行了诱导表达，并对表达蛋白进行His-Tag亲和纯化，结果表明，表达蛋白的分子量和预计的相等，为58．9kD，表达量占菌体总蛋白的45％。体外酶促反应分析得出，G→L或W

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