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目的
建立定量黑猩猩腺病毒68型(chimpanzee adenovirus type 68，AdC68)含量的双抗体夹心ELISA，并验证其可行性。
方法用表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein，GFP)的非复制型AdC68(AdC68GFP)感染HEK293细胞，收获病变细胞并进行超速离心纯化AdC68GFP。用纯化AdC68GFP免疫家兔制备抗AdC68GFP抗体。以抗AdC68GFP抗体为包被抗体，辣根过氧化物酶标记的抗腺病毒HEXON IgG为酶标抗体，建立双抗体夹心ELISA，确定该法的线性范围，并验证该法的准确度、精密度、专属性和适用性。
结果纯化AdC68GFP的蛋白浓度为38.8 μg/ml，其中HEK293细胞蛋白浓度低于0.3 μg/ml。双抗体夹心ELISA的最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为1∶50和1∶500。该法的线性范围为0.06～3.88 μg/ml，线性相关系数为0.999 6。高、低浓度AdC68GFP样品的回收率分别为93.17%和94.33%，变异系数分别为6.72%和3.44%。该法可特异性检测AdC68GFP抗原，未发现与HEK293细胞蛋白发生交叉反应。应用该法检测AdC68GFP纯化过程中的样品可反映病毒的纯化效果。
结论建立的双抗体夹心ELISA具有良好的准确度、精密度和专属性，可用于AdC68纯化工艺过程中对病毒蛋白含量的快速检测。