【摘 要】
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目的:建立高转移胃癌细胞株并研究其肿瘤干细胞生物学特征。方法:将胃癌细胞株SNU-5接种至裸鼠皮下成瘤后,取肺部转移灶,通过机械分离法并反复接种裸鼠,获取细胞株SNU-5-V12,
【机 构】
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国家癌症中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院细胞及分子生物学实验室,
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目的:建立高转移胃癌细胞株并研究其肿瘤干细胞生物学特征。方法:将胃癌细胞株SNU-5接种至裸鼠皮下成瘤后,取肺部转移灶,通过机械分离法并反复接种裸鼠,获取细胞株SNU-5-V12,采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定SNU-5-V12细胞中存在肿瘤干细胞。流式细胞术分析SNU-5和SNU-5-V12细胞中CD44肿瘤干细胞标志物表达情况,分选SNU-5和SNU-5-V12细胞中CD44~+细胞并进行体外生物学特征研究及裸鼠致瘤实验。结果:建立高转移SNU-5-V12细胞株,SNU-5-V12细胞无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。流式分析显示高转移SNU-5-V12细胞中干细胞标志物CD44比例显著高于SNU-5细胞[(72.9±1.5)%vs(8.96±1.2)%],且SNU-5-V12的CD44~+细胞比SNU-5的CD44~+细胞具有更强的自我更新能力[成球率(27.8±1.7)%vs(20.4±1.0)%,P<0.01],转移细胞数增加1.64倍[(329.5±7.5)vs(200±2.0)个,P<0.01],耐药能力也显著增强[IC50:(0.286 vs 0.196)μg/ml,P<0.01],裸鼠皮下接种2×102个CD44~+SNU-5-V12细胞2个月2/6裸鼠可致瘤,而CD44~+SNU-5细胞需要接种2×104个细胞2个月时仅1/6裸鼠致瘤。结论:获得高转移胃癌细胞株SNU-5-V12,其CD44~+细胞体内外功能显著增强,为胃癌干细胞的靶向治疗提供有价值的细胞模型。
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