背景 缺氧导致的视网膜新生血管性疾病已成为主要的致盲疾病,目前临床上缺乏有效的化学治疗方法,因此,研究其发病的分子机制从而指导临床用药十分关键. 目的 探讨15羟二十四碳四烯酸(15-HETE)对缺氧条件下培养的视网膜微血管内皮细胞(RMVECs)增生、凋亡的影响及其作用通路. 方法 分离C57BL/6J小鼠的RMVECs并用细胞除杂法进行培养,用间接免疫组织化学及免疫荧光检测法鉴定培养的细胞对内皮细胞的特征性标志物Ⅷ因子相关抗原的反应.将生长良好的细胞分为常氧组和缺氧组,后者以终浓度为125 μmol/L的CoCl2处理细胞建立缺氧模型.各组细胞换无血清含内皮细胞生长添加剂(ECGS)和高糖的DMEM培养基继续培养48 h,再按照培养基中加入15-HETE浓度的不同(终浓度分别为0.0、0.1、1.0、5.0μmol/L)分别将常氧组和缺氧组细胞亚分为4个组.各组细胞分别用15-HETE处理48 h,然后用MTT法检测各组细胞的增生值(吸光度,A值),并计算15-HETE的抑制率;分别采用逆转录PCR(RT-RCR)法及Western blot法检测各组RMVECs中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、bcl-2和caspase-3 mRNA及其蛋白的相对表达量. 结果 间接免疫组织化学法检测结果显示,培养的细胞对Ⅷ因子相关抗原呈阳性表达,细胞阳性率为(94.38±4.25)％.常氧培养条件下不同浓度15-HETE培养组RMVECs增生值(A值)的差异无统计学意义(F=0.283,P=0.837),但缺氧培养条件下不同浓度15-HETE培养组RMVECs增生值的差异有统计学意义(F=702.582,P＜0.001),其中缺氧+1.0 μmol/L 15-HETE处理组、缺氧+5.0 μmol/L 15-HETE处理组RMVECs增生值明显低于单纯缺氧培养组,差异均有统计学意义(P＜0.05).0.1、1.0、5.0μmol/L 15-HETE处理组对RMVECs的抑制率分别为(1.09±0.31)％、(21.09±3.53)％和(49.86±4.15)％,随着15-HETE浓度的增加,抑制率逐渐升高.常氧条件下各组bcl-2、caspase-3和HIF-1α mRNA的表达差异均无统计学意义,与单纯常氧培养组比较,单纯缺氧培养组RMVECs中bcl-2和HIF-1α mRNA的相对表达量分别升高1.5倍和1.7倍,而caspasse-3 mRNA的表达降低了70％,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);在用不同浓度15-HETE干预的缺氧细胞中,bcl-2、HIF-1α的相对表达量随着15-HETE浓度的增高呈逐渐下降的趋势,而caspasse-3mRNA的表达则逐渐上升.常氧条件下各组细胞bcl-2、pro-caspase-3蛋白相对表达量差异均无统计学意义(P＞0.05),但与单纯常氧培养组比较,单纯缺氧培养组bcl-2、pro-caspase-3蛋白相对表达量分别上升1.6倍和1.9倍,差异均有统计学意义(P＜0.05);在缺氧条件下,bcl-2和pro-caspase-3蛋白的表达量随15-HETE浓度的增高逐渐下降,5.0 μmol/L 15-HETE处理组分别是单纯缺氧培养组的40.4％和42.5％,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 15-HETE可能通过下调HIF-1α、bcl-2及激活caspase-3的方式抑制缺氧诱导下RMVECs的增生,从而对缺氧导致的新生血管生成产生抑制作用,其作用呈剂量依赖的方式。