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MicroRNA(miR)-19b是通过芯片筛选出与心脏发育高度相关的一种miRNA,本研究旨在研究miR-19b通过Wnt/β-catenin信号通路对P19细胞的影响。
方法生物信息学软件预测miR-19b潜在靶基因;双荧光素酶报告基因验证miR-19b是否作用于Wnt的预测靶点;脂质体2000转染miR-19b过表达质粒与空载质粒进入P19细胞;CCK-8法检测细胞增殖活性;磷脂酰丝氨酸外翻分析检测细胞凋亡;Western blot检测Wnt1表达水平;实时定量-聚合酶链反应(PCR)检测miRNA-19b表达水平。
结果TargetScan 5.1软件预测Wnt1为miR-19b在P19细胞中发挥作用的潜在靶点,双荧光素酶报告基因进行了验证,miR-19b过表达显著降低了靶基因Wnt的活性(P<0.05);miR-19b过表达降低了Wnt信号通路中Wnt1和β-catenin的表达水平,两者水平表达一致,于第2天至第10天均有统计学差异(P均<0.05)。与空载对照组相比,miRNA-19b可促进P19细胞的增殖(各时间点P<0.05),并且抑制其凋亡(P<0.05)。
结论miR-19b可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进P19细胞的增殖,抑制凋亡,为其以后用于心脏发育的进一步研究奠定基础。