牛nanog基因原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达

来源 :农业生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：chencr33

【摘要】

：

从6周龄的胎牛（Bos taurus）原始生殖嵴中提取总RNA，通过RT-PCR扩增nanog基因，将其克隆到PMD-18T载体，然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体上，获得原核表达质粒pGEX-KG-nanog，限制性内切酶

【作者】

：

郑喜邦云彦胡勇策王华岩窦忠英

【机构】

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西北农林科技大学国家干细胞工程技术中心陕西分中心,广西大学动物科技学院

【出处】

：

农业生物技术学报

【发表日期】

：

2008年5期

【关键词】

：

nanog分子克隆原核表达牛 nanog gcne molecular cloning prokaryotic expression bovine

【基金项目】

：

基金项目：国家高技术研究与发展计划（863）项目（No.2005AA219050）、教育部重大项目（No.03160）、国家自然科学基金（No.36071067）和陕西省重大科技专项（No.2006kz05-G1）资助.

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从6周龄的胎牛（Bos taurus）原始生殖嵴中提取总RNA，通过RT-PCR扩增nanog基因，将其克隆到PMD-18T载体，然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体上，获得原核表达质粒pGEX-KG-nanog，限制性内切酶分析和DNA测序证明所插入片段为牛nanDg基因编码序列。重组质粒转化大肠杆菌JM109（Escherichia coli），在不同的培养温度（25、30和37℃）和不同浓度的IPTG（0．10、0．25、0．50、1．00和2．00mmol／L）诱导下均获得了表达，结果表明，培养温

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