【摘 要】
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利用环介导恒温扩增(LAMP)技术,以微囊藻毒素(Microcystins,MCs)合成基因簇中的mcy G基因为靶序列,设计了1套LAMP引物,建立了LAMP反应体系并进行灵敏度和特异性实验。结果表
【机 构】
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浙江省宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室
【基金项目】
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浙江省重大科技专项重点农业项目(2012C12009-4);宁波市海洋藻类资源高效开发利用创新团队项目(2011B81007)
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利用环介导恒温扩增(LAMP)技术,以微囊藻毒素(Microcystins,MCs)合成基因簇中的mcy G基因为靶序列,设计了1套LAMP引物,建立了LAMP反应体系并进行灵敏度和特异性实验。结果表明mcy G基因的最低检测限为:24 cfu/m L,远低于常规PCR(Polymerase Chain Reaction)。整个检测过程仅需40 min,且可直接目测结果。特异性实验中,13株淡水常见水华蓝藻分属:色球藻属(Chroococcus)、念珠藻属(Nostoc)、鱼腥藻属(Anabaena)、束丝藻属(Aphanizomenon)、微囊藻属(Microcystis),其中10株呈阳性反应,3株为阴性。在野外样品检测中,来自太湖与黄庆苗池塘的水样PCR检测显示阴性反应,而LAMP检测均呈阳性反应,提示此两处水样中可能含有产毒微囊藻,显示出了LAMP检测方法良好的野外检测和预警能力。综合上述,LAMP检测方法能够快速检测产微囊藻毒素的关键基因,且结果可视化。该方法简便、快捷、不依赖特殊检测设备,极具推广前景。
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