粉尘螨I类抗原cDNA的克隆表达和初步鉴定

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【摘要】

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目的构建粉尘螨Ⅰ类抗原(Der f 1)eDNA基因的重组表达质粒，并于E-coli表达。方法用BamHⅠ和Sac Ⅰ从重组质粒pMD-18T-Der f1上切下Der f1基因，插入表达载体pET32a(+)质粒，转化大

【作者】

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杨庆贵李朝品

【机构】

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安徽理工大学医学院病原学与免疫学教研室

【出处】

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免疫学杂志

【发表日期】

：

2004年6期

【关键词】

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粉尘螨抗原 CDNA 基因重组原核表达 Dermatophagoides farinae Antigens cDNA Gene recombinant

【基金项目】

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安徽省自然科学基金资助项目 (0 30 4 330 3)

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目的构建粉尘螨Ⅰ类抗原(Der f 1)eDNA基因的重组表达质粒，并于E-coli表达。方法用BamHⅠ和Sac Ⅰ从重组质粒pMD-18T-Der f1上切下Der f1基因，插入表达载体pET32a(+)质粒，转化大肠杆菌BL21，在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重组子，并经双酶切及PCR扩增鉴定。重组质粒pET32a(+)-Der f1转化大肠杆菌，WIG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和薄层凝胶扫描定量分析。结果对重组质粒进行酶切和PCR鉴定，与预期结果相符，证明已成功构建携带Der fⅠ

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