【摘 要】
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目的 研究人瘢痕疙瘩形成过程中微小RNA-214-5p(miR-214-5p)与分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)2对成纤维细胞增殖及凋亡的影响并分析可能作用机制.方法 分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)与正常皮肤成纤维细胞(NFB),miR-214-5p mimic、miR-NC、si-SFRP2、si-NC分别转染KFB细胞,应用qRT-PCR与Western印迹分别检测miR-214-5p、SFRP2 mRNA及蛋白表达变化.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法与流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡.采用双
【机 构】
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佛山市第一人民医院烧伤整形创面修复外科,广东 佛山 528000
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目的 研究人瘢痕疙瘩形成过程中微小RNA-214-5p(miR-214-5p)与分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)2对成纤维细胞增殖及凋亡的影响并分析可能作用机制.方法 分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)与正常皮肤成纤维细胞(NFB),miR-214-5p mimic、miR-NC、si-SFRP2、si-NC分别转染KFB细胞,应用qRT-PCR与Western印迹分别检测miR-214-5p、SFRP2 mRNA及蛋白表达变化.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法与流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡.采用双荧光素酶报告实验检测miR-214-5p是否可调控SFRP2基因.结果 KFB细胞中miR-214-5p表达水平显著低于NFB细胞(P<0.05),而SFRP2 mRNA与蛋白表达水平显著高于NFB组(P<0.05).miR-214-5p组KFB细胞增殖活力明显低于miR-NC组(P<0.05),与miR-NC组相比,miR-214-5p组CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而p21、p27蛋白表达水平显著升高(P<0.05),转染miR-214-5p mimic后KFB细胞凋亡率显著高于miR-NC组(P<0.05),Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05),而Bax、酶切caspase-3表达水平均显著升高(P<0.05),SFRP2与miR-214-5p存在结合位点,共转染miR-214-5p mimic与WT-SFRP2野生型质粒的KFB细胞相对荧光素酶活性显著低于共转染miR-NC与WT-SFRP2野生型质粒的KFB细胞(P<0.05),表明miR-214-5p可与SFRP2基因的3′UTR结合而调控其活性.miR-214-5p组SFRP2蛋白(0.17±0.03)显著低于miR-NC组(0.58±0.05,P<0.05);anti-miR-214-5p组SFRP2蛋白(0.92±0.08)显著高于anti-miR-NC组(0.59±0.06,P<0.05).相较于si-NC组,转染si-SFRP2可显著抑制细胞增殖及显著促进细胞凋亡,共转染miR-214-5p mimic与pcDNA-SFRP2后细胞增殖活力显著高于miR-214-5p+pcDNA组(P<0.05),与miR-214-5p+pcDNA组比较,miR-214-5p+pcDNA-SFRP2组细胞凋亡能力显著降低(P<0.05).结论 miR-214-5p负向调控SFRP2表达并通过影响细胞增殖及凋亡蛋白表达进而抑制KFB增殖并促进细胞凋亡.
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