【摘 要】
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目的在小鼠胚胎干细胞上进行α-1,3半乳糖基转移酶(α-GT)基因打靶.方法利用长距离PCR和套式PCR从C57小鼠基因组DNA中克隆出α-GT基因组DNA片段,构建了针对α-GT基因外显子4
【机 构】
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第三军医大学解剖学教研室,第三军医大学微生物学教研室
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目的在小鼠胚胎干细胞上进行α-1,3半乳糖基转移酶(α-GT)基因打靶.方法利用长距离PCR和套式PCR从C57小鼠基因组DNA中克隆出α-GT基因组DNA片段,构建了针对α-GT基因外显子4的置换型基因打靶载体ploxp-GT,同源长臂(5.0kb),同源短臂(3.97kb),同源序列全长共约9.0kb.将打靶载体酶切线性化并以电穿孔方法转移入小鼠ME ES细胞.结果通过G418和Gancyclovir正负选择出171株ES细胞药物抗性克隆,Southern blot鉴定获得11个α-Gal(+/-)小鼠ES细胞克隆,重组频率为6.4%.结论上述方法能够完成α-GT基因敲除,为进一步完成α-GT基因敲除小鼠奠定了基础.
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