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目的
利用Luminex xTAG技术,建立能高通量鉴别沙门菌H抗原的xTAG悬浮芯片法,用于沙门菌的血清型别鉴定。
方法以沙门菌编码H抗原的fliC和fljB基因为目标基因,选取其保守片段设计上游通用引物,选取可变片段设计下游特异性引物;合成时上游引物的5′端用生物素标记,下游引物的5′端连接特定的TAG序列;标本经多重PCR扩增并标记生物素和TAG序列后,与含anti-TAG序列的编码磁珠混合液杂交分型,通过生物素与链霉亲和素-藻红蛋白的反应报告结果。利用建立的xTAG悬浮芯片法鉴定145株沙门菌日常分离株的H抗原,并与传统的血清凝集试验比较。
结果31种沙门菌H抗原经多重PCR扩增后,与xTAG磁珠杂交后可鉴别分型,各H抗原间无交叉反应,且重复性良好,与大肠埃希菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌及志贺菌DNA等亦无交叉反应。对145株沙门菌进行H抗原鉴定,与传统的血清凝集试验比较,其敏感度为95.1%,特异度为100%。
结论利用xTAG悬浮芯片法鉴定沙门菌H抗原,特异准确,可在4~5 h内完成90多株常见血清型沙门菌的H抗原鉴定。