【摘 要】
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目的 研制检测尿中AD7C-NTP诊断试剂盒,并分析评价其在诊断AD中的临床应用价值.方法 固相法合成具有免疫原性的AD7C-NTP抗原决定簇多肽片段,通过免疫动物、制备抗体、配对筛选,以小鼠抗ADTC-NTP抗体作为包被抗体,以生物素标记兔抗AD7C-NTP抗体和辣根过氧化物酶标记亲和素建立ELISA检测尿AD7C-NTP的方法;并用以检测和分析121例AD患者与118名同龄健康人清晨中段尿液中
【机 构】
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100053,北京,首都医科大学宣武医院中心实验室教育部神经变性病重点实验室,100053,北京,首都医科大学宣武医院中心实验室教育部神经变性病重点实验室,100053,北京,首都医科大学宣武医院中心
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目的 研制检测尿中AD7C-NTP诊断试剂盒,并分析评价其在诊断AD中的临床应用价值.方法 固相法合成具有免疫原性的AD7C-NTP抗原决定簇多肽片段,通过免疫动物、制备抗体、配对筛选,以小鼠抗ADTC-NTP抗体作为包被抗体,以生物素标记兔抗AD7C-NTP抗体和辣根过氧化物酶标记亲和素建立ELISA检测尿AD7C-NTP的方法;并用以检测和分析121例AD患者与118名同龄健康人清晨中段尿液中AD7C-NTP的水平差异.结果 经过鉴定,小鼠抗AD7C-NTP抗体的ELISA检测效价为1:8 000,兔抗AD7C-NTP抗体的ELISA检测效价为1:32 000;WB检测人脑标本中抗AD7C-NTP抗体的相对分子质量为41 000.自建ELISA检测AD7C-NTP的灵敏度为0.2μg/L,线性范围为0-10μg/L,正常参考值1.5μg/L,平均回收率为100.2%,批内CV为3.8%和4.5%,批间CV为7.6%和6.8%.AD组尿AD7C-NTP[2.25(0.43-8.62)μg/L]高于健康对照组[0.82(0.47-2.77)μg/L,P<0.01],AD组和健康对照组阳性率分别为89.3%和15.3%,AD7C-NTP检测的敏感度为89.3%、特异度为84.7%.结论 用自行设计合成的多肽片段免疫动物,成功制备了抗AD7C-NTP抗体,初步建立的尿AD7C-NTP的ELISA检测方法精密度和灵敏度高,有可成为临床诊断AD的辅助手段。
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