含质粒复制起始区ori44的苏云金芽胞杆菌解离载体的构建

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将苏云金芽胞杆菌转座子Tn4430的解离酶识别位点res分别插入克隆载体pRSET B和pUC19得到质粒pBMB1201和pBMB1202.这两个质粒分别经BamHI/HindⅢ和EcoRUHindⅢ双酶切回收含res位点的小DNA片段,与穿梭载体pHT3101经EcoRI/HindⅢ双酶切后回收的含大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因和红霉素抗性基因的3.3kb片段连接,获得重组质粒pBMB1203.封闭pBMB1203两res位点外的BamHI和EcoRI位点后,得到解离载体pBMB1204.将来
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