【摘 要】
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目的 基于沉默信息调节因子1(SIRT1)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径探讨丹酚酸B(SalB)抗氧化应激致细胞损伤的作用机制,以期阐明丹酚酸B抗心肌缺血的作用机制.方法 采用体外构建H2O2诱导的氧化应激细胞模型,将H9c2细胞分为6组,分别为正常组、模型组(600 μmol·L-1 H2O2刺激)、H2O2+丹酚酸 B(5、10、20 μmol·L-1)组和 H2O2+丹酚酸 B(20 μmol·L-1)+EX527(10 μmol·L-1)组.采用 MTT 法测定细胞活性;Hoech
【机 构】
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江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,南京中医药大学药学院,江苏南京210023
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目的 基于沉默信息调节因子1(SIRT1)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径探讨丹酚酸B(SalB)抗氧化应激致细胞损伤的作用机制,以期阐明丹酚酸B抗心肌缺血的作用机制.方法 采用体外构建H2O2诱导的氧化应激细胞模型,将H9c2细胞分为6组,分别为正常组、模型组(600 μmol·L-1 H2O2刺激)、H2O2+丹酚酸 B(5、10、20 μmol·L-1)组和 H2O2+丹酚酸 B(20 μmol·L-1)+EX527(10 μmol·L-1)组.采用 MTT 法测定细胞活性;Hoechst染色法测定细胞凋亡;比色法及ELISA法分别测定乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-1β水平;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;采用JC-1荧光探针测定线粒体膜电位;Western Blot法测定H9c2细胞中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC),以及SIRT1信号通路相关的SIRT1、磷酸化AMP蛋白活化激酶α(p-AMPKα)、AMP蛋白活化激酶α(AMPKα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组细胞活力及线粒体膜电位明显降低(P＜0.01),细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH和炎症因子IL-1β水平明显升高(P＜0.01);与NLRP3炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白表达显著上调(P＜0.01),SIRT1、p-AMPKα/AMPKα和PGC-1α蛋白表达明显下调(P＜0.01).与模型组比较,丹酚酸B组的细胞活力以及线粒体膜电位显著升高(P＜0.05,P＜0.01),细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH及炎症因子IL-1β释放水平明显降低(P＜0.01).丹酚酸B能够明显上调SIRT1信号通路中SIRT1、p-AMPKα/AMPKα、PGC-1α蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),下调 NLRP3炎症小体相关的 NLRP3、Caspase-1 和 ASC 蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),且呈一定量效关系.在应用SIRT1特异性抑制剂EX527干预后,丹酚酸B抑制H2O2诱导的NLRP3炎症小体激活作用被明显逆转.结论 丹酚酸B可能通过激活SIRT1/AMPK/PGC-1α信号通路,抑制氧化应激诱导的NLRP3炎症小体的激活,继而发挥抗心肌缺血作用.
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