【摘 要】
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目的 利用RNAi技术抑制乳腺癌细胞株MCF-7 survivin基因,观察MCF-7细胞株的细胞凋亡率、survivin蛋白表达及对多西他赛(docetaxel)药物敏感性的变化.方法 以培养的乳腺癌MCF-
【机 构】
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蚌埠医学院生化与分子生物学教研室,安徽,蚌埠,233000;蚌埠市中心医院肿瘤科,安徽,蚌埠,233000;蚌埠医学院临床检验诊断实验中心,安徽,蚌埠,233000
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目的 利用RNAi技术抑制乳腺癌细胞株MCF-7 survivin基因,观察MCF-7细胞株的细胞凋亡率、survivin蛋白表达及对多西他赛(docetaxel)药物敏感性的变化.方法 以培养的乳腺癌MCF-7细胞株为体外研究模型,设对照组、空载体组及RNAi组进行实验.(1)半定量RT-PCR、Western blot法检测survivin mRNA、蛋白在各组细胞中的表达;(2)用流式细胞术分析各组细胞周期及细胞凋亡率的影响;(3)用MTT法分析多西他赛对各组细胞存活率作用的浓度.结果 (1)RT-PCR检测结果显示,RNAi组survivin扩增条带(134 bp)明显弱于空载体组及对照组,mRNA相对含量较空载体组明显下降(75.4%),差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot检测空载体组与对照组survivin蛋白条带明显存在,且基本一致,而RNAi组同样位置的条带基本消失(79.8%);(2)RNAi组细胞阻滞在G0/G1期,与空载体组和对照组分别比较,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)MTT比色法检测结果显示,不同浓度多西他赛处理后对照组、空载体组、RNAi组的IC50分别为(124.7±0.21)、(116.9±0.25)、(15.2±2.8)μg·L-1,RNAi组MCF-7细胞对多西他赛的药物敏感性增高(P=0.000).结论 RNAi明显抑制了survivin在转录及翻译水平的表达;RNAi抑制survivin基因表达,能明显提高乳腺癌MCF-7细胞对多西他赛的药物敏感性.
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