【摘 要】
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【目的】克隆鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus，AngHV）的ORF115基因，获得序列生物信息学特征，分析其在病毒入侵细胞过程中的转录时相，原核表达OR115，为解析ORF115基因的特性及功能奠定基础。【方法】根据GenBank中AngHV参考株（NC＿013668）序列，设计特异性扩增ORF115基因的引物，从分离的AngHV-FJ福建株（AngHV-FJ）基因组中PC
【基金项目】
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福建省公益类科研院所基本科研业务专项（2022R1027001）； 福建省农业科学院“5511”协同创新工程建设项目（XTCXGC2021013）；
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【目的】克隆鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus，AngHV）的ORF115基因，获得序列生物信息学特征，分析其在病毒入侵细胞过程中的转录时相，原核表达OR115，为解析ORF115基因的特性及功能奠定基础。【方法】根据GenBank中AngHV参考株（NC＿013668）序列，设计特异性扩增ORF115基因的引物，从分离的AngHV-FJ福建株（AngHV-FJ）基因组中PCR扩增出目的片段，克隆至pMD19-T载体，经酶切和测序验证，获得ORF115基因序列。采用在线软件分析该序列生物信息学特征；采用RT-PCR对ORF115基因进行转录时相分析；将ORF115基因克隆至表达载体pET-32a，转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导蛋白表达，对产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。【结果】克隆获得的AngHV-FJ ORF115基因全长318 bp；生物信息学预测表明，OR115蛋白属酸性弱疏水蛋白，较稳定，存在跨膜结构，无信号肽，主要分布于细胞质中，有长片段抗原表位；转录时相分析表明，ORF115基因属于病毒晚期基因，可能在病毒感染的晚期阶段发挥作用。SDS-PAGE及Western blotting分析显示，实现了ORF115基因在大肠杆菌中的表达，表达蛋白大小与预期一致，约32 kD。【结论】AngHV ORF115属酸性弱疏水蛋白，有长片段抗原表位，属于病毒晚期基因，通过原核表达获得OR115重组表达蛋白，为后期制备多克隆抗体及研发AngHV亚单位疫苗提供研究基础。
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