目的观察氟尿嘧啶(5-Fu)联合丝裂霉素(mitomycin,MMC)对胆管癌细胞QBC939的自噬、衰老、凋亡的影响,并探讨自噬、衰老、凋亡之间的相互关系及相关机制。方法 5-Fu(25、50、100、150、200μg/mL)、MMC(0.25、0.50、1.0、1.5、2.0μg/mL)及两者相应终浓度的混合溶液分别对胆管癌QBC939细胞作用0、24、48 h后,分别用CCK-8法检测细胞增殖并确定后续实验中化疗药物作用时间及联合化疗药物浓度,Annexin V-FITC染色及流式细胞仪检测细胞凋亡,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverin,MDC)染色及流式细胞仪检测细胞自噬;用广谱半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂Z-VAD-FMK阻断凋亡,用3-甲基腺嘌呤(3-MA)阻断自噬并再次用上述方法检测增殖、自噬、衰老及凋亡变化情况。结果 5-Fu联合MMC(终浓度分别为100、1.0μg/mL)作用24 h时,QBC939增殖受到明显抑制且细胞尚未出现大量死亡,利于各项指标的检测,各组差别有统计学意义(F=26.929,P<0.05);自噬抑制剂作用后,自噬减少,增殖抑制,衰老细胞阳性率降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.01);凋亡抑制剂作用后,凋亡减少,增殖增强、衰老细胞阳性率增高明显,自噬变化不明显。结论 5-Fu联合MMC能明显抑制胆管癌细胞QBC939增殖及衰老,促进细胞凋亡,这些变化均与联合化疗药物作用后胆管癌细胞自噬作用的变化有关。