【摘 要】
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利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens Conn)介导法,将山菠菜甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因转入四倍体刺槐(Robinia pseudoacacia L.)。结果表明,以愈伤组织作为外植体、液体分
【机 构】
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山东省林业科学研究院,山东省林业科学研究院,中国科学院遗传与发育生物学研究所,山东农业大学园艺学院,山东省林业科学研究院,山东省林业科学研究院,山东省林业科学研究院,山东省林业科学研究院,山东省林业科
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利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens Conn)介导法,将山菠菜甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因转入四倍体刺槐(Robinia pseudoacacia L.)。结果表明,以愈伤组织作为外植体、液体分化培养基(MS+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1)活化农杆菌、转化培养基中2 0 mg·L-1乙酰丁香酮、菌液浓度OD600值0.3-0.7、预培养1~2d、浸染4~8 min、共培养4~8 d、延迟1 5 d选择的条件下,4 00 mg·L-1头孢霉素可有效抑制农杆菌,卡那霉素为5 0 mg·L-1时愈伤组织上芽的白化率达97.3%。经PCR和PCR-Southecn检测,外源基因已成功整合到植株基因组DNA中;转化植株丛生芽生长的NaCl相对抗性提高了2‰~3‰。
The Agrobacterium tumefaciens Conn mediated method was used to transfer the betaine aldehyde dehydrogenase (BADH) gene from the spinach to tetraploid Robinia pseudoacacia L. The results showed that Agrobacterium was activated by liquid differentiation medium (MS + 6-BA 2.0 mg · L-1 and IBA 0.2 mg · L-1) with callus as explants and transformed into medium with 20 mg · L -1 acetosyringone. The concentration of OD600 was 0.3-0.7, precultured for 1-2 days, dipped for 4-8 minutes, cocultured for 4-8 days, and delayed for 15 days. Under the conditions of 400 mg · L -1 Cefotaxime was effective in inhibiting Agrobacterium. The rate of whiteing of callus was 97.3% when kanamycin was 50 mg · L-1. The exogenous genes were successfully integrated into plant genomic DNA by PCR and PCR-Southecn. The relative resistance of NaCl-induced shoots increased by 2 ‰ -3 ‰.
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