【摘 要】
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目的探讨慢病毒介导的干扰RNA(RNAi)下调人表皮生长因子2(HER2)基因表达对卵巢癌化疗敏感性的影响。方法构建特异性靶向HER2基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒表达载体和阴性对
【机 构】
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畅苏州大学,畅苏州大学附属第一医院
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目的探讨慢病毒介导的干扰RNA(RNAi)下调人表皮生长因子2(HER2)基因表达对卵巢癌化疗敏感性的影响。方法构建特异性靶向HER2基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;建立稳定表达HER2-shRNA的SKOV3细胞株(KD)及阴性对照细胞株(NC),以未感染的SKOV3细胞为CON组,通过RT-PCR和Western blot技术检测3种细胞HER2基因的表达,CCK-8法测定3种细胞对顺铂的化疗敏感性的变化;CON及KD细胞株分别建立裸鼠皮下移植瘤模型,检测各组裸鼠移植瘤中HER2蛋白的表达,以及经顺铂化疗后的瘤体大小。结果通过荧光表达情况及流式细胞学表明已成功建立稳定表达HER2-shRNA的细胞株及阴性对照细胞株。RT-PCR结果:KD组细胞HER2 mRNA的相对表达量与NC组相比降低,差异有统计学意义(P<0.01),而与CON组相比无显著差异,KD组的HER2 mRNA抑制率为(95.5±0.12)%。转导特异性HER2-shRNA后卵巢癌移植瘤细胞HER2蛋白表达明显减少,经顺铂治疗后生长明显减缓(P<0.01)。结论慢病毒介导的HER2-shRNA可以有效抑制HER2基因的表达,增加卵巢癌对顺铂的化疗敏感性。
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