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先运用正交设计进行初步筛选,再用单因素设计逐一优化对ISSR-PCR扩增效果有影响的Mg2＋、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、模板DNA、循环次数及退火温度。建立了黄枝油杉的最佳反应体系和程序,即25μL体系中含2.0mmol/L的Mg2＋、1.5UTaq DNA聚合酶、0.10mmol/L的dNTP、1.0μmol/L的引物、30ng的模板DNA以及2.5μL10×PCR buffer,其余的用灭菌的ddH2O补够25μL。扩增程序：94℃预变性5min;94℃变性30s,48～56℃（